以免疫親和管柱與極致液相層析/串聯式質譜儀搭配同位素稀釋技術分析市售咖啡飲品中赭麴毒素A

Abstract

赭麴毒素A（Ochratoxin A, OTA）具腎毒性，廣泛存在於食物中，例如咖啡豆。因咖啡豆烘焙過程無法有效除去當中原有的OTA，故飲用咖啡飲品可能會暴露到OTA。 本研究開發以電灑游離（electrospray ionization, ESI）串聯式質譜儀搭配極致液相層析與同位素稀釋技術定量咖啡飲品中OTA之方法。經質譜儀參數適化並偵測OTA最佳母離子（precursor ion, [M+H]+）和兩個訊號最強子離子（product ion）。 前處理部分，添加經同位素標定之OTA內標準品至10 mL咖啡樣本中，離心後取上清液，以三倍體積磷酸緩衝液稀釋，續以每秒1滴之流速通過免疫親合性管柱（immunity affinity column, IAC），然後用去離子蒸餾水流洗管柱，再用甲醇沖提。沖提液經過濾並減壓離心濃縮至近乾，回溶後上機分析。層析管柱為Ascentis Express RP-amide，流速1.0 mL/min，移動相為0.1% 甲酸水溶液與乙腈，層析溫度為40℃，使用梯度流析，連同管柱再平衡之層析時間為3分鐘。 本研究樣本回收率範圍為84.5–117%，相對標準差（RSD）小於15%。基質效應結果顯示樣本訊號強度受到43%的抑制，而同位素稀釋技術可有效準確定量並消除基質效應對於定量之影響。咖啡樣本於同日異日重複分析之RSD皆低於15%。偵測極限和定量極限分別為0.52 pg/mL及1.73 pg/mL。 為瞭解市售咖啡飲品中OTA含量情形，本研究於2010年三月底到五月份中旬至便利商店和連鎖咖啡店購入現煮咖啡40件、罐裝即飲咖啡24件、即溶咖啡6件，共70件樣本，其中檢出66件，濃度範圍為2.0–131 pg/mL；現煮咖啡平均濃度較低，即溶咖啡平均濃度較高。一般而言，建議攝取咖啡飲品時儘量選擇由新鮮咖啡豆沖泡之現煮咖啡；若飲用罐裝即飲咖啡或即溶咖啡，建議一天以不超過4–5杯為宜。

Ochratoxin A (OTA) is common contaminant in food resulting from a secondary metabolite of fungi, and the International Agency for Research on Cancer (IARC) has classified OTA as a possible human carcinogen (2B). The processes of baking coffee beans are not able to remove OTA completely. Humans are exposed to OTA via drinking coffee drinks. This study developed and validated a method to determine the concentrations of OTA in coffee drinks using immunoaffinity column extraction and detection of ultra-high performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS) with isotope-dilution techniques by 13C20-OTA as the internal standard. The OTA was analyzed on an Ascentis Express RP-amide column (50