以固相萃取及液相層析�質譜�質譜儀分析鮮奶與奶粉中黃麴毒素M1

Abstract

黃麴毒素為食品與飼料中常見的黴菌毒素。當牛隻食用含黃麴毒素B1的飼料後，其乳汁中可能產生代謝物黃麴毒素M1，具有肝毒性與致癌性。因為一般消毒過程無法去除黃麴毒素，各國莫不對其加強管制。歐盟自1999年起將黃麴毒素M1在鮮乳中的容許量由0.5 μg/L降至0.05 μg/L, 對現有檢測方法形成挑戰。 分析鮮乳或奶粉中黃麴毒素M1的確認方法，以液相層析儀及螢光偵測為主；因需要經由衍生化來增強螢光性，過程耗時且使用毒性試劑。樣本前處理則常以固相萃取加上免疫親和性管柱淨化；因管柱流速緩慢，僅使用20-50毫升的樣本，限制了靈敏度，再加以無適當的內標準品，導致分析變異性頗大。 本研究改善分析靈敏度，並縮短檢測時間。在樣本的萃取、淨化及儀器分析條件的最適化做了以下的探討︰（1）以質譜/質譜儀取代螢光偵測；（2）以圓盤型吸附劑增大樣本體積；（3）樣本淨化方法之比較；（4）嘗試合成氘或氧18標定的穩定內標品；（5）分析方法驗證。 本研究顯示牛奶樣本可大至200毫升而無破出情形，且較一般檢測方法樣本加大了4∼10倍。分析方法之精密度與回收率，隨著不同基質及不同淨化方式而有所t異︰（1）以免疫親和性管柱淨化：全脂奶粉、全脂鮮奶以及低脂鮮奶的回收率分別為：67.9 ± 9.3％、78.2 ± 7.3％ 及86.6 ± 4.1％（平均值 ± 標準差）；方法偵測極限全脂鮮奶及低脂鮮奶各為0.59 ± 0.19 ng/L（1.02 ng/L）及0.66 ± 0.12 ng/L（0.94 ng/L）（平均值 ± 標準差（99％ 信度方法偵測極限））。（2）以多功能淨化管柱淨化：全脂鮮奶及低脂鮮奶的回收率分別為6.51 ± 0.28％ 及15.8 ± 4.6％（平均值 ± 標準差）；方法偵測極限各為14.1 ± 2.6 ng/L（24.6 ng/L）及9.22 ± 3.34 ng/L（16.8 ng/L）（平均值 ± 標準差（99％ 信度方法偵測極限））。以免疫親和性管柱及多功能淨化管柱，分別淨化認証參考樣本BCR-282奶粉，方法偵測極限分別為0.0085 ± 0.00050 μg/kg（0.0096 μg/kg）及0.0082 ± 0.0022 μg/kg （0.013 μg/kg）（平均值 ± 標準差（99% 信度方法偵測極限））。 內標品的合成上，本研究顯示確有氧16與氧18交換現象，但反應無法趨於完全，未反應之16O-黃麴毒素將造成偽陽性；以氘標定的方式，因反應條件需在鹼性、高溫及長時間進行，使得黃麴毒素分解，無法合成穩定的同位素標定內標品。而以黃麴毒素B1作為回收標準品，其訊號強弱與M1之趨勢並不一致，效果也不盡理想，並不適合做為內標品。尋找一個適合定量牛奶中黃麴毒素M1之內標品，仍有待進一步的研究。 本方法應用於分析鮮奶，方法偵測極限比現存方法低了三至五百倍，為牛乳檢測提供優異的靈敏度。

Milk may contain aflatoxin M1 (AFM1) if cows ingest aflatoxin B1（AFB1）, which is a usual contaminant in animal feed. AFM1 is toxic and carcinogenic to liver, and can survive after pasteurization. The European Union has reduced the regulated level down to 0.05 μg/L and has challenged the existing analytical methods. To confirm the existence of aflatoxin M1, the most used measurement is by high-performance liquid chromatography (HPLC)/fluorescence detection. Usually derivatization is needed to enhance the fluorescence of aflatoxin M1, which needs toxic reagent and additional time. In terms of sample preparation, the sample size is limited to 20