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標題: | 斑馬魚抑制性肌鈣蛋白(TnI)的cDNA結構及發育時
的動態表現 The Molecular Structure and Dynamic Expression of Zebrafish (Danio rerio) TnI |
作者: | Chen-Min Lin 林晨敏 |
指導教授: | 蔡懷楨 |
關鍵字: | 斑馬魚抑制性肌鈣蛋白, TnI, |
出版年 : | 2005 |
學位: | 碩士 |
摘要: | 肌鈣蛋白複合物(Troponin, Tn)含有抑制性肌鈣蛋白(TnI),其功能乃抑制粗肌絲和細肌絲之間的作用來控制肌肉的收縮。臨床上在急性冠狀動脈病徵下,心臟型TnI被當作具有高度敏感性和專一性的指標。在鳥類和哺乳動物中,已經確立存在三種不同isoform的TnI,分別是快肌型、心肌型和慢肌型。但是在低等脊椎動物中,對於TnI基因的了解並未十分透徹。為了研究低等脊椎動物的TnI基因的分子結構和在發育上的表現,我們選殖了斑馬魚的心臟型(cTnI)和慢肌型(sTnI)和快肌型(fTnI)。斑馬魚的cTnI與人類的cTnI有62%的相同程度。斑馬魚的sTnI與人類的sTnI有50%的相同程度,而斑馬魚的fTnI與人類的fTnI有43%的相同度。經過反轉錄-聚合酵素鏈鎖反應,偵測斑馬魚三型的TnI,發現自受精卵起即有表現,應是母體效應(maternal effect)。藉由原位雜交染色法,顯示斑馬魚cTnI mRNA會專一表現在心肌,sTnI mRNA會專一表現在慢肌,而fTnI mRNA會專一表現在快肌。但有趣的是,sTnI mRNA的表現在受精50小時後,會從軀幹處的肌肉消失而開始轉移,並在受精後72小時表現在魚鰭。fTnI mRNA也有相同轉移的情況,只是在受精後54小時開始發生,並在受精後72小時分別表現在魚鰭、介於胸骨柄背部與舌骨間
的一束肌肉(sternohyoideus, sh)和內收下顎肌(adductor mandibulae, am)的部位。本文證明了斑馬魚中存在著不同isoform的TnI,而這個結果可以提供我們更瞭解脊椎動物之TnI基因調節機制及在胚胎發育中所擔任的角色。 Troponin I (TnI), a troponin component, inhibits the generation of acto-myosin and controls muscle contraction. Cardiac TnI is highly sensitive and specific markers of myocardial injury in acute coronary syndromes. Although troponin I genes have been identified in birds and mammals that encode the isoforms expressed in cardiac muscle, slow skeletal muscle and fast skeletal muscle, there is extremely little known about troponin I genes in lower vertebrates. In order to analyze the molecular structure and dynamic expression of TnI gene in lower vertebrates, we cloned and characterized the zebrafish cTnI (cardiac TnI), sTnI (slow TnI ), and fTnI (fast TnI ). The deduced amino acid sequences of zebrafish cTnl, sTnl and fTnl shared 62%, 50% and 43% identities with human cTnI, sTnI and fTnI, respectively. RT-PCR showed that zebrafish cTnI, sTnI and fTnI mRNA were inherited in a maternal manner. Whole-mount in situ hybridization revealed that the zebrafish cTnI was cardiac-muscle specific, sTnI was slow-muscle specific and fTnI was fast-muscle specific. However, zebrafish sTnI signal disappeared in the somite at 50 hours-post-fertilization (hpf) embryos, while fTnI signal disappeared at 54 hpf embryos. The expression of zebrafish sTnI was in the fin bud at 72 hpf embryos; whereas fTnI was expressed in the fin bud, sternohyoideus and adductor mandibulae cranial muscles at 72 hpf embryos. These findings may provide us new insight about developmental regulation and molecular evolution of vertebrate TnI isofroms. |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/35137 |
全文授權: | 有償授權 |
顯示於系所單位: | 分子與細胞生物學研究所 |
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