不同PCV2分離株誘導IFN-α產生的能力及調控基因序列差異性之比較

Abstract

為探討是否不同的田間PCV2病毒株間，在誘導巨噬細胞產生干擾素α ( IFN-α ) 的作用上有所不同，而此不同與其基因序列的差異有關，因此進行此實驗。由田間獲得的病弱豬隻之脾臟、淋巴結、扁桃腺等組織塊，先抽取DNA，經PCR確定為PCV2陽性後，實驗分成兩部份進行：第一部份為DNA萃取，進行全長基因定序、分析及比較。第二部分則在基因序列比對後，將呈現顯著不同的病毒株再經病毒分離、增殖、定量﹙in PK–15 cell line﹚後，分別接種於豬肺泡巨噬細胞，收集上清液進行IFN-α檢測，獲得的結果再與基因序列做比較，以了解彼此間的關聯性。本實驗共收集58個經PCR檢測含有PCV2之病材，有45個完全定序，其中有7個PCV2分離株可進行病毒分離並檢測其力價。在完全定序的45株由田間偵測到的PCV2樣本中，分析發現所得的序列全長可分為1767 bp或1768 bp兩組，且其中有五株PCV2含有可抑制豬周邊血液單核球 ( PBMCs ) 產生IFN-α的作用的ODN，其基因序列全長都為1768 bp；經分析已發表於GenBank的PCV2，發現均有類似的情形。自完全定序之病毒株中選出12株進行核酸序列比對，全長核酸序列相似性為94.7 -99.9％，主要差異發生在ORF2的區域 ( 核酸序列相似性為89.5-100.0％ )。在IFN-α檢測方面，不同的PCV2病毒株彼此間誘導IFN-α產生的能力上確實有所不同，而PCV2確實是IFN-α誘導者，但與含或不含有抑制作用的ODN關連性較小，進一步與多段已發表之ODNs進行比對發現，PCV2核酸序列中含有多段具刺激IFN-α產生能力的ODNs；並且發現近年來PCV2核酸序列似有轉變的現象，變為以1767 bp的病毒株為主，而1768 bp的病毒株與含有抑制IFN-α產生的ODN的病毒株皆有減少的趨勢。由本實驗可知，PCV2核酸序列全長、可抑制IFN-α產生的ODN及誘導IFN-α產生能力之間有關連性存在，而此或許與PCV2感染後造成差異甚大的臨床症狀的致病機制有關。