腸炎弧菌胞外蛋白酶 PrtA 調控機制之研究

Abstract

腸炎弧菌（Vibrio parahaemolyticus）屬於革蘭氏陰性的細菌，生長於海洋及河川出海口。人類因為食用受汙染的魚或有殼海鮮類而受感染造成腹瀉症狀，或者是不慎傷口曝於受汙染的海水造成感染。Vibrio parahaemolyticus No. 93 為一株不具有 tdh 及 trh 溶血素之台灣臨床分離株。其胞外鹼性絲胺酸蛋白酶，PrtA（VPA0227），已證實為可能的致病因子。由於哈維氏弧菌（Vibrio harveyi）及溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）之胞外蛋白酶受 LuxR 同源性蛋白質所調控，而且弧菌屬中 LuxO-LuxR 系統具有高度保留性，在 PrtA 啟動子上游具有 LuxR 結合的保守序列。本研究目的為探討腸炎弧菌 No. 93 的胞外蛋白酶 PrtA 是否會受 LuxR 之同源蛋白質， OpaR（VP2516），所調控。本研究以先決條件分析（Precondition assay）得知腸炎弧菌之胞外蛋白酶活性受 LuxO-OpaR 系統影響。分別構築腸炎弧菌LuxO 和 OpaR 的突變株和補償株，在 Heart Infusion soft Agar 上觀察遊走能力的表現型態，證實 OpaR 會抑制腸炎弧菌的遊走能力。然而受測試菌的菌落透明度均無明顯地變化。此外， Q-PCR的結果顯示 prtA 和 vppC 的轉錄表現時間不同，分別在 3 和 6 小時其轉錄表現量最高，胞外蛋白酶 prtV 則是以穩定的方式持續表現。突變株