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DC 欄位 | 值 | 語言 |
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dc.contributor.advisor | 李水盛 | |
dc.contributor.author | Chiu-Ling Chen | en |
dc.contributor.author | 陳秋玲 | zh_TW |
dc.date.accessioned | 2021-06-08T05:11:58Z | - |
dc.date.copyright | 2006-08-03 | |
dc.date.issued | 2006 | |
dc.date.submitted | 2006-07-21 | |
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dc.identifier.uri | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/23874 | - |
dc.description.abstract | 本研究第一部份利用毛細管電泳進行厚朴(houpo)之兩種活性成份厚朴酚(magnolol)及和厚朴酚(honokiol)之分析,並以UV吸收及雷射誘導螢光偵測方式來進行分析。最佳化的分析條件各為:pH為9.6之45 mM與10 mM硼酸鈉(sodium tetraborate)緩衝液,分析時間各於七分鐘和三分鐘內完成,且偵測極限各可達μM及nM level。文獻指出厚朴酚會導致細胞凋亡,於是本研究培養結腸癌細胞(WiDr)觀察厚朴酚對於細胞作用之時間與濃度的關係。亦將80 μM的厚朴酚加入至細胞培養液一天後,分析培養液之成分,發現僅約25%之厚朴酚存留於培養基中。
本研究第二部份利用毛細管電泳分析金奈米粒子輔助聚合酶連鎖反應(nanogold-assisted polymerase chain reaction)之產物。以粒線體與第九凝血因子(factor IX)為PCR放大之產物,加入13 nm的金奈米粒子(gold nanoparticles, GNPs)或聚合物(poly(ethylene oxide), PEO)於聚合酶連鎖反應中,結果發現適量的加入1.0 μl的GNPs和0.5%的 PEO (8 MDa),其複製效率(efficiency)增加。此外,改變熔融溫度(melting temperature, Tm),亦發現加入13 nm GNPs於PCR中可提高其專一性(specificity)。 | zh_TW |
dc.description.abstract | This thesis was consisted of two parts. In the first part, two active compounds, honokiol and magnolol, were analyzed by capillary electrophoresis with UV and laser-induced fluorescence detection. The optimized conditions of two detection methods were 45 mM and 10 mM tetraborate (pH 9.6), and the separations were accomplished within seven and three minutes, respectively. The limits of detection (LOD) were in μM and nM range. Furthermore, we studied the concentration effect and exposure of magnolol on WiDr cell cultrues. Also, about 25% of 80 μM magnolol remained in the cell medium after being added into cell medium.
In the second part, 13-nm gold nanoparticles and poly(ethylene oxide) were added in PCR and the PCR products were analyzed by capillary electrophoresis. The amplified products were mitochondria DNA (6 kbp) and factor IX (20 kbp). The results showed that the addition of gold nanoparticles and poly(ethylene oxide) could enhance the yield and that the adjustment of the melting temperature could increase the specificity in the presence of gold nanoparitcles in PCR. | en |
dc.description.provenance | Made available in DSpace on 2021-06-08T05:11:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ntu-95-R93423014-1.pdf: 836508 bytes, checksum: 6ec290bd975d0eb2ac710711a567788d (MD5) Previous issue date: 2006 | en |
dc.description.tableofcontents | 總目錄
中文摘要 I 英文摘要 II 總目錄 1 圖目錄 7 表目錄 9 第一章 序論 9 1.1毛細管電泳的歷史 9 1.2毛細管電泳的分離原理 12 1.2.1 電泳淌度 12 1.2.2 電滲流與Zeta電位 13 1.3 毛細管凝膠電泳法 16 1.3.1 聚合物溶液 17 1.3.2 生物大分子的電泳遷移機制 18 1.3.2.1 奧格斯頓模型 18 1.3.2.2 爬行模型 18 1.4 DNA的分離與序列分析 21 1.4.1 DNA在自由溶液中的電泳遷移 21 1.4.2 毛細管電泳之DNA序列分析 21 1.5 毛細管電泳之偵測系統 23 1.5.1 紫外光-可見光吸收偵測 23 1.5.2 雷射誘導螢光偵測 24 1.5.2.1 DNA的偵測 25 1.6 聚合酶連鎖反應之基本原理及應用 26 1.6.1 聚合酶連鎖反應之基本原理 26 1.6.2 聚合酶連鎖反應之組成及其對實驗的影響 27 1.6.2.1 引子 27 1.6.2.2 融熔溫度 28 1.6.2.3 DNA聚合酶 28 1.6.2.4 緩衝溶液和鹽類 29 1.6.2.5 鎂離子濃度 30 1.6.2.6 去氧核苷三磷酸 30 1.7 奈米粒子概論 30 1.7.1 金奈米粒子之應用 31 1.8 研究動機 32 1.8.1 厚朴之毛細管電泳分析 32 1.8.2 金奈米輔助聚合酶連鎖反應產物之毛細管電泳分析 33 1.9 參考文獻 35 第二章 厚朴之定性定量分析 43 2.1 序論 43 2.1.1厚朴之簡介 45 2.1.1.1 別名與藥材來源 45 2.1.1.2 性狀、性味與效用 45 2.1.1.3 藥理作用 45 2.1.1.4 化學成份 46 2.2 實驗部份 48 2.2.1 儀器 48 2.2.2 藥品及試劑 49 2.2.3 標準品溶液 49 2.2.4 毛細管之處理 50 2.2.5 UV吸收偵測方法之實驗步驟與確效 50 2.2.6 厚朴中活性成分之定量測定 52 2.2.7 結腸癌細胞株與細胞培養 52 2.3 實驗結果與討論 53 2.3.1 UV吸收偵測方法之分析參數的探討 53 2.3.1.1 吸收圖譜與螢光光譜 53 2.3.1.2 緩衝溶液與pH值 53 2.3.1.3 緩衝溶液的濃度 54 2.3.1.4 施加的電壓 55 2.3.1.5 內標準品之選擇 55 2.3.2 毛細管電泳條件 55 2.3.2.1 UV吸收偵測之條件 55 2.3.2.2雷射誘導螢光偵測之條件 56 2.3.2.3 厚朴酚與細胞作用之時間關係條件 56 2.3.3 UV吸收偵測方法之確效 57 2.3.3.1 精密度 57 2.3.3.2 線性 57 2.3.3.3 準確度 57 2.3.3.4 厚朴中活性成分之定量測定 58 2.3.3.5 雷射誘導螢光與UV吸收偵測之LOD比較 58 2.3.4 厚朴酚對於WiDr細胞之影響 58 2.4 結論 58 2.5 參考文獻 60 第三章 金奈米輔助聚合酶連鎖反應產物之毛細管電泳分析 82 3.1 序論 82 3.2 儀器裝置、實驗試藥及配置 85 3.2.1 儀器裝置 85 3.2.2 實驗試藥 85 3.2.3 毛細管之前處理 86 3.2.4 檢體製備 86 3.2.4.1 粒線體之DNA萃取 86 3.2.4.2 血液之DNA萃取 87 3.2.5 聚合物溶液的製備 87 3.2.6 金奈米粒子製備 88 3.2.7 金奈米聚合物溶液製備 88 3.3 實驗部份 89 3.3.1 PCR實驗流程 89 3.3.2 毛細管電泳實驗流程 89 3.4 結果與討論 90 3.5 參考文獻 93 圖目錄 圖 1-1 (a) 毛細管電雙層結構示意圖及zeta電位(b) 以電壓方式及壓力方式推動液面流型 40 圖 1-2. (a) 奧格斯頓模型:剛性球體分析物在聚合物溶液中的運動 式 (b) 爬行模型:具伸縮性之分析物在聚合物溶液中的運動模式 41 圖1-3 毛細管電泳裝置圖 42 圖2-1 厚朴酚與和厚朴酚之吸收光譜圖 62 圖2-2 厚朴酚與和厚朴酚之螢光光譜圖 63 圖2-3 以不同pH值的緩衝液分離厚朴酚及和厚朴酚之電泳圖…...64 圖2-4 以不同濃度的緩衝液分離厚朴酚及和厚朴酚之電泳圖…….65 圖2-5 在最佳化條件下,以UV吸收偵測方法分離和厚朴酚與厚朴酚之電泳圖 66 圖 2-6 以CE-LIF偵測方法分離和厚朴酚與厚朴酚之電泳圖 67 圖 2-7 Tetraborate濃度對於分離細胞培養液與厚朴酚的影響 68 圖 2-8 SDS溶液塞對於分離細胞培養液與厚朴酚之影響 69 圖 2-9 和厚朴酚之校正曲線 70 圖 2-10 厚朴酚之校正曲線 70 圖 2-11 以CE-UV偵測方法分析實際樣品厚朴之酚類萃取物 71 圖 2-12 以CE-LIF偵測在不同的時間點,分析培養過的細胞培養液 中厚朴酚含量 72 圖 2-13 厚朴酚之峰面積對時間作圖 73 圖 2-14 厚朴酚之濃度對於WiDr細胞數目之影響 74 圖 2-15 在不同的時間下,厚朴酚對於WiDr細胞數目之影響 74 圖 3-1 PCR產物與kilobase DNA marker之電泳圖 95 圖 3-2 6-kbp PCR產物之電泳圖。分別加入0、0.5、1.0 and 2.5 μl 13-nm GNPs於PCR中 96 圖 3-3 在不同的熔融溫度下,比較未加入金奈米粒子及加入13-nm 金奈米粒子的PCR產物(6 kbp)電泳圖 97 圖 3-4 在不同的熔融溫度下,比較未加入金奈米粒子及加入13-nm 金奈米粒子的PCR產物20 kbp電泳圖 98 表目錄 表 2-1 分析厚朴之兩活性成分方法之比較 75 表 2-2 三日間之和厚朴酚與厚朴酚的遷移時間 76 表 2-3 和厚朴酚與厚朴酚的遷移時間之重複性與再現性的RSD值 77 表 2-4 三日之間和厚朴酚與厚朴酚的峰高度比 78 表 2-5 和厚朴酚與厚朴酚的峰高度比之重複性與再現性的RSD值 79 表2-6 和厚朴酚校正曲線之資料 80 表 2-7厚朴酚校正曲線之資料 80 表 2-8 厚朴酚及和厚朴酚之回歸方程式 81 表 2-9 和厚朴酚與厚朴酚之回收率 81 表 2-10 厚朴中兩活性成分之含量 81 表 2-11 以UV/visible及LIF偵測方法所得之最低偵測極限 81 表 3-1 分別加入13-nm GNPs、GNPPs與GNPPs*於PCR中,並以毛細管電泳分析其結果(6 kbp PCR產物 99 | |
dc.language.iso | zh-TW | |
dc.title | 厚朴之酚類化合物及金奈米輔助聚合酶連鎖
反應產物之毛細管電泳分析 | zh_TW |
dc.title | Analyses of phenol compounds in houpo and nanogold-assisted polymerase chain reaction
products by capillary electrophoresis | en |
dc.type | Thesis | |
dc.date.schoolyear | 94-2 | |
dc.description.degree | 碩士 | |
dc.contributor.coadvisor | 張煥宗 | |
dc.contributor.oralexamcommittee | 郭錦樺,吳秀梅 | |
dc.subject.keyword | 厚朴,毛細管電泳,和厚朴酚,厚朴酚,聚合酶,連鎖反應,金奈米粒子, | zh_TW |
dc.subject.keyword | houpo,capillary electrophoresis,honokiol,magnolol,PCR,gold nanoparticles, | en |
dc.relation.page | 99 | |
dc.rights.note | 未授權 | |
dc.date.accepted | 2006-07-22 | |
dc.contributor.author-college | 醫學院 | zh_TW |
dc.contributor.author-dept | 藥學研究所 | zh_TW |
顯示於系所單位: | 藥學系 |
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