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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/17300
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DC 欄位 | 值 | 語言 |
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dc.contributor.advisor | 林璧鳳(Bi-Fong Lin) | |
dc.contributor.author | Chun-Chi Hou | en |
dc.contributor.author | 侯俊吉 | zh_TW |
dc.date.accessioned | 2021-06-08T00:05:41Z | - |
dc.date.copyright | 2013-08-26 | |
dc.date.issued | 2013 | |
dc.date.submitted | 2013-08-13 | |
dc.identifier.uri | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/17300 | - |
dc.description.abstract | 實驗性自體免疫腦脊髓炎 (EAE) 為多發性硬化症中常用的動物模式,主要由Th1及Th17主導,且伴隨神經發炎的症狀。因此本研究擬以細胞模式找到具有調節Th1/Th17及抗神經發炎的食材,再應用於實驗性自體免疫腦脊髓炎中,探討是否具有減緩病情的作用。細胞實驗先以非特異性抗原anti-CD3/28刺激正常小鼠初代脾臟細胞,經苜蓿芽乙酸乙酯萃物 (ASEA) 預處理,可顯著降低IL-2及IFN-γ分泌量,也有降低IL-17、IL-6的趨勢。將MOG35-55誘發EAE小鼠脾臟細胞以特異性抗原MOG35-55刺激,ASEA同樣可顯著降低IL-2及IFN-γ,卻顯著增加IL-17及IL-6。而以流式細胞儀分析,發現ASEA顯著增加MOG35-55刺激下的CD4+及CD4+IFN-γ+細胞比例。最後以ASEA預處理C8-B4神經微膠細胞株,可降低TNF-α、IL-6、IL-12/23 p40及MCP-1的分泌量,可能具有抗神經發炎的作用。
在MOG35-55誘發EAE小鼠動物模式中,於誘發後每天管餵ASEA可延緩EAE病程,並降低浸潤於脊髓中CD4+細胞比例及脾臟細胞自發性的IL-2分泌量,且兩者皆與病情呈顯著正相關 (分別為r= 0.778, p< 0.001; r= 0.527, p< 0.001),可能因此具有延緩病程的作用;此外,短期餵食ASEA也可增加與病情呈負相關 (r= -0.358, p= 0.0295) 之脾臟調節型T細胞比例,並降低淋巴結細胞對MOG35-55刺激所分泌的IL-17與IL-6。這些結果顯示短期餵食ASEA,可能藉由降低脾臟細胞自發性分泌的IL-2與減少浸潤於脊髓中的CD4+細胞,而有延緩EAE病程發展的作用。 | zh_TW |
dc.description.abstract | Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), which is a common animal model of multiple sclerosis, is dominated by Th1 and Th17, accompanied by neuroinflammation. This study was first to investigate the capability of modulating Th1/Th17 and anti-neuroinflammation in food extract in vitro, and then we evaluated the effects of the food extract on EAE in vivo.
First, the primary splenocytes from normal C57BL/6J female mice were pretreated with ASEA, followed by treatment with anti-CD3/28. The results showed that ASEA could significantly decrease Th1 (IL-2, IFN-γ) and Th17 (IL-17, IL-6) cytokines. Then, primary splenocytes and lymph node cells from MOG35-55-induced EAE C57BL/6J female mice were treated as before. Similarly, ASEA could significantly decrease Th1 cytokines, but significantly increase Th17 cytokines. Flow cytometric analysis of splenocytes showed ASEA significantly increased the percentage of MOG35-55-stimulated CD4+ cells and CD4+IFN-γ+ cells, but there was no difference in CD4+IL-17+ cells. Further, ASEA significantly reduced IL-6, IL-12/23p40 and MCP-1 secretions by C8-B4 microglial cell line, which suggested that ASEA had the potential for anti-neuroinflammation. Finally, female C57BL/6J mice were fed intragastrically with ASEA once a day (3.6 mg and 14.5 mg/kg BW, as the preASEA-L group and the preASEA-H group, respectively) for 59 days until sacrificed. The ASEA-H group was fed with 14.5 mg ASEA/kg BW for 17 days since the day of immunization. EAE clinical symptoms were delayed in the ASEA-H group. We examined the changes in the immunologic parameters, including Th1/Th17 population in CNS, spleen and lymph nodes, and ex vivo cytokines production. The preASEA-L group had lower Th1 population and ex vivo Th1 cytokine production in splenocytes. The infiltrating CD4+ cells population in spinal cord and spontaneous IL-2 secretion in the splenocytes of MOG35-55-induced EAE mice were higher than in normal mice; moreover, positive correlation existed between both parameters and area under curve (AUC) of EAE score (r= 0.778, p< 0.001 in CD4+ cells; r= 0.527, p< 0.001 in IL-2). We found that the ASEA-H group significantly reduced both important parameters, and it also had lower ex vivo MOG35-55-stimulated IL-17 and IL-6 production in lymph nodes. In addition, the ASEA-H group enhanced regulatory T cell (Treg) population, which had a negative correlation with sacrificed EAE score (r= -0.358, p= 0.0295). These results showed that mice fed with ASEA at immunization delayed the development of MOG35-55-induced EAE, accompanied with lower infiltrating CD4+ cells population in spinal cord and spontaneous IL-2 secretion in splenocytes, which suggests the potential of beneficial effects of ASEA for delaying EAE symptoms. | en |
dc.description.provenance | Made available in DSpace on 2021-06-08T00:05:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ntu-102-R00b22014-1.pdf: 2015198 bytes, checksum: ae94faf2dd170c025c0d2daefc016920 (MD5) Previous issue date: 2013 | en |
dc.description.tableofcontents | 摘要 I
ABSTRACT II 目錄 IV 圖目錄 VIII 表目錄 X 縮寫對照表 XII 第一章 緒論 1 第一節 文獻回顧 1 一、多發性硬化症 1 1. 免疫與神經系統簡介 1 2. 多發性硬化症簡介 2 3. 多發性硬化症可能病因 3 4. 多發性硬化的動物模式 5 二、實驗性自體免疫腦脊髓炎 5 1. 參與病程的細胞 5 2. 其他和病程相關的細胞激素及荷爾蒙 12 三、飲食因子對於多發性硬化症及EAE的影響 13 1. 飲食因子 13 2. 富含植物雌激素的食材 13 第二節 研究動機與架構 17 一、研究動機 17 二、研究架構 18 第二章 以初代脾臟細胞與神經微膠細胞株評估食材之調節TH1/TH17及抗神經發炎能力 19 第一節 前言 19 第二節 材料與方法 19 一、樣品配製與細胞取得 19 (一) 神經微膠細胞株C8-B4培養 19 (二) 苜蓿芽及山苦瓜乙酸乙酯萃物及苜蓿芽甲醇萃物製備 20 (三) 初代脾臟細胞取得與培養 21 (四) 淋巴結細胞取得與培養 22 二、實驗分析 23 (一) 細胞存活率分析 23 (二) 細胞激素含量之測定 23 (三) 流式細胞儀分析 25 三、統計方法 26 第三節 結果 27 一、苜蓿芽與山苦瓜不同萃物對初代脾臟細胞存活率的影響 27 二、苜蓿芽與山苦瓜萃物對初代脾臟細胞分泌細胞激素的影響 28 三、苜蓿芽與山苦瓜乙酸乙酯萃物對EAE小鼠初代脾臟細胞受特異性MOG刺激下分泌細胞激素的影響 30 四、苜蓿芽與山苦瓜乙酸乙酯萃物對EAE小鼠淋巴結細胞在特異性MOG刺激下分泌細胞激素的影響 31 五、苜蓿芽與山苦瓜萃物對EAE小鼠Th1及Th1細胞亞群的影響 32 六、苜蓿芽與山苦瓜乙酸乙酯萃物對C8-B4神經微膠細胞株存活率的影響 34 七、苜蓿芽與山苦瓜乙酸乙酯萃物對C8-B4神經微膠細胞株分泌細胞激素的影響 35 第四節 討論 37 一、MTT細胞存活率與DNA螢光定量法之比較 37 二、苜蓿芽乙酸乙酯萃物對神經微膠細胞株分泌細胞激素能力的影響 37 三、苜蓿芽與山苦瓜乙酸乙酯萃物使脾臟細胞表現更多的表面分子CD4 37 四、選擇食材萃物作為動物實驗之用 38 五、劑量換算 40 第三章 苜蓿芽乙酸乙酯萃物對實驗性自體免疫腦脊髓炎小鼠的影響 41 第一節 前言 41 第二節 材料與方法 42 一、苜蓿芽乙酸乙酯萃物樣品配製 42 二、動物實驗設計 43 (一) 動物飼養 43 (二) 誘發EAE方法 43 (三) 藥物Minocycline處理 44 (四) 臨床症狀評分標準 44 (五) 實驗流程與分組 44 三、脾臟細胞取得與培養 46 四、淋巴結細胞取得與培養 46 五、細胞增生測定 46 六、浸潤於腦及脊髓之單核細胞取得與培養 47 七、以流式細胞儀分析細胞內Th1及Th17及B細胞比例 48 八、血清之收集與血清中抗體測定 48 九、細胞激素含量測定 49 十、統計分析 49 第三節 結果 50 一、生長情形與臨床症狀評估 50 二、器官重量與相對重量 53 三、脾臟與淋巴結內B細胞與Th1及Th17比例 53 四、浸潤於脊髓與腦的Th1及Th17細胞比例 58 五、脾臟細胞細胞激素分泌量 61 六、淋巴結細胞細胞激素分泌量 64 七、脾臟細胞與淋巴結細胞增生能力 67 八、血清中細胞激素與MOG特異性抗體之比較 68 第四節 討論 75 一、不同時間點給予苜蓿芽乙酸乙酯萃物對於病程及病情的影響 75 二、與EAE病情相關之指標 76 三、苜蓿芽乙酸乙酯萃物對於EAE小鼠體內Th1與Th17的影響 78 四、preASEA-L組病情嚴重程度與免疫反應並不相稱 79 五、Minocycline對於EAE的抑制效果 79 第四章 綜合討論與總結 81 第一節 綜合討論 81 一、MOG誘發EAE小鼠之生化指標 81 二、以初代脾臟細胞篩選出來之食材應用於EAE之探討 82 三、苜蓿芽乙酸乙酯萃物內可能有效成份對於EAE的影響 83 四、本研究可改進項目 84 第二節 總結 88 參考文獻 89 | |
dc.language.iso | zh-TW | |
dc.title | 苜蓿芽乙酸乙酯萃物對實驗性自體免疫腦脊髓炎的影響 | zh_TW |
dc.title | Effects of ethyl acetate extract of alfalfa sprouts on experimental autoimmune encephalomyelitis | en |
dc.type | Thesis | |
dc.date.schoolyear | 101-2 | |
dc.description.degree | 碩士 | |
dc.contributor.oralexamcommittee | 江伯倫(Bor-Luen Chiang),江孟燦(Meng-Tsan Chiang),洪永瀚(Yong-Han Hong),陳錫洲(Shyi-Jou Chen) | |
dc.subject.keyword | 多發性硬化症,實驗性自體免疫腦脊髓炎,苜蓿芽乙酸乙酯萃物,Th1,Th2,介白素-2, | zh_TW |
dc.subject.keyword | Multiple sclerosis,experimental autoimmune encephalomyelitis,alfalfa sprout ethyl acetate extracts,Th1,Th2,Interleukin-2, | en |
dc.relation.page | 102 | |
dc.rights.note | 未授權 | |
dc.date.accepted | 2013-08-13 | |
dc.contributor.author-college | 生命科學院 | zh_TW |
dc.contributor.author-dept | 生化科技學系 | zh_TW |
顯示於系所單位: | 生化科技學系 |
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