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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/15521
標題: | 探討Src磷酸化調控之dynamin-2在侵襲體的活性及功能 Src-mediated Dynamin-2 Phosphorylation Regulates Its Activity at Podosome |
作者: | Tsung-Lin Hsieh 謝宗霖 |
指導教授: | 劉雅雯(Ya-Wen Liu) |
關鍵字: | 侵襲體,dynamin-2,Src 磷酸酶磷酸化, Podosome,dynamin-2,Src kinase phosphorylation, |
出版年 : | 2020 |
學位: | 碩士 |
摘要: | 侵襲體是一種受到Src 磷酸酶所調控、並且由肌動蛋白所組成的結構,這樣的結構對於細胞的貼附、移動、侵襲是非常重要的。另一方面,一個能夠調控膜組織的三磷酸鳥苷水解酶 dynamin-2 (Dyn2) 被發現會聚集到侵襲體的附近去幫助細胞貼附結構的胞吞作用,以及調控束狀的肌動蛋白進而影響侵襲體的軟硬程度。然而,目前還不清楚是什麼機制來調控Dyn2的活性以及如何促使他聚集到侵襲體附近。有鑑於酪胺酸磷酸酶Src 已經被發現是一個很重要的調控者來調控侵襲體的形成,同時又能夠去磷酸化Dyn2,因此我們猜測Src對於Dyn2的磷酸化也許是一個很重要的機制來去調控他在侵襲體上的活性。為了驗證以上的推測,我們針對Dyn2上會被Src磷酸酶磷酸化的位點進行突變,並且利用細胞實驗及生化實驗進行觀察。我們發現仿磷酸化(Y597E)及不能被磷酸化(Y597F)兩種Dyn2的突變蛋白都對於Dyn2本身的活性以及他和肌動蛋白之間的交互作用有很大的影響,甚至進一步的影響侵襲體的外觀形狀及功能。除此之外,仿磷酸化(Y597E) Dyn2突變會增加和肌動蛋白接合的能力,但會降低和脂質的親和力。總而言之,我們發現酪胺酸磷酸酶Src 對於Dyn2的磷酸化是一個很重要的機制來調控Dyn2在侵襲體附近的活性。 Podosomes are Src kinase regulated, actin-rich structures critical for cell adhesion, migration and invasion. While the membrane remodeling GTPase dynamin-2 (Dyn2) has been found to be enriched at podosomes to mediate adhesion molecule endocytosis as well as to regulate the bundling of actin and the stiffness of podosome, the mechanism orchestrating the activity and recruitment of Dyn2 to podosome is still unclear. Given that tyrosine kinase Src is the critical regulator of podosome assembly and Dyn2 is a substrate of Src kinase, we hypothesize that Src kinase-mediated phosphorylation of Dyn2 may play an important role for its activity at podosome. We thus investigate the effect of Dyn2 mutants on the Src phosphorylation sites with cell biological and biochemical approaches. We found that both the phospho-mimetic (Y597E) and phospho-deficient (Y597F) mutants of Dyn2 have significant impacts on its activity as well as Dyn2-actin association that further alter podosome morphology and function. Strikingly, the phospho-mimetic Dyn2 displays higher actin bundling activity, but a decreased lipid binding ability. Together, our findings demonstrate that Src kinase phosphorylation serve as a critical regulation to dictate Dyn2 activity at podosome structures. |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/15521 |
DOI: | 10.6342/NTU202002359 |
全文授權: | 未授權 |
顯示於系所單位: | 分子醫學研究所 |
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