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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/9063
標題: | 大腸桿菌gspS基因表現之調控 Regulation of gspS gene expression in Escherichia coli |
作者: | Hsuan-He Chen 陳宣合 |
指導教授: | 吳蕙芬(Whei-Fen Wu) |
關鍵字: | GspS,Gsp,BaeR,氧化壓力,GrxA,GrxB, GspS,Gsp,BaeR,Oxidative stress,GrxA,GrxB, |
出版年 : | 2009 |
學位: | 碩士 |
摘要: | Glutathionylspermidine synthetase (GspS) 是一種具有雙重功能的酵素,具有合成酶 (synthetase) 活性,可催化glutathione與spermidine間醯胺鍵的形成,產生glutathionylspermidine (Gsp),也有醯胺酶 (amidase) 活性,可使Gsp的醯胺鍵水解成glutathione及spermidine。由於Gsp為原生動物病原蟲與大腸桿菌等生物中所特有,與其相關之酵素遂成為研究對抗此類病原蟲藥物的目標。目前GspS的蛋白質之結晶結構已被解出,對蛋白質活性區域以及反應機制有更進一步的認識,但是GspS在大腸桿菌中扮演何種角色、gspS基因表現受到哪些因子調控,皆尚未清楚。
為了瞭解gspS的調控方式,首先以5’RACE (Rapid-Amplification of cDNA Ends) 確認轉錄起始點 (transcription start site),並進一步分析gspS上游的promoter區域及cis-binding site位置,包含預測之BaeR binding site。利用不同長度及BaeR binding site突變之gspS-lacZ operon fusion進行β-galactosidase 活性分析,發現在大腸桿菌中BaeR大量表現可誘導gspS表現量上升,顯示BaeR為一可能之轉錄因子,而且即使BaeR大量表現,預測之BaeR binding site突變仍然無法使gspS表現量增加,推測BaeR跟gspS上游的cis-binding site應為直接結合造成gspS表現量上升。 利用不同濃度H2O2對gspS−及一系列對抗氧化壓力 (oxidative stress) 相關突變株 (trxA−、trxB−、grxA−、grxB−) 的影響,發現gspS−grxA−與gspS−grxB−之雙重突變株對H2O2造成之氧化壓力耐受程度較wild type和gspS−、grxA−、grxB−單一突變株低,推測GspS和 GrxA、GrxB在功能上可能可以互相替代。 |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/9063 |
全文授權: | 同意授權(全球公開) |
顯示於系所單位: | 農業化學系 |
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