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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/84479
標題: | 利用單分子螢光方法觀察RAD51及其同源蛋白之交互作用 Using Single-Molecule Fluorescence Methods to Study the Interaction of RAD51 and Its Paralogs |
作者: | Tzu-Yu Lee 李子于 |
指導教授: | 李弘文(Hung-Wen Li) 李弘文(Hung-Wen Li | hwli@ntu.edu.tw | ), |
關鍵字: | 同源重組,RAD51,RAD51同源蛋白,BCDX2蛋白複合體,單分子螢光, homologous recombination,RAD51,RAD51 paralogs,BCDX2 complex,single-molecule fluorescence, |
出版年 : | 2022 |
學位: | 碩士 |
摘要: | RAD51同源同種物(paralog)是參與同源重組(homologous recombination)修復的重要蛋白。BCDX2是由RAD51同源同種物RAD51B、RAD51C、RAD51D、及XRCC2組成的蛋白複合體,被認為能協助RAD51聚集。我使用了三種單分子螢光方法了解BCDX2是否影響RAD51和DNA的結合。螢光標記蛋白和零模波導(zero-mode waveguides)的螢光實驗發現BCDX2和DNA的結合反應是一動態過程,且在RAD51存在時結合能力下降。單分子螢光共振能量轉移(FRET)實驗發現,在含有BCDX2的情況下,RAD51蛋白絲對單股和雙股DNA所產生的拉伸效果並未受到影響。然而,BCDX2在有ATP的條件之下提昇了RAD51在雙股DNA上的蛋白誘導之螢光增強效應(protein-induced fluorescence enhancement)。此效應與反應時間相關,且可能反映出ATP水解反應的參與。這些觀察為未來研究BCDX2在同源重組中扮演的角色,提供新的資訊。 RAD51 paralogs are important proteins that participate in homologous recombination repair. One of the heteromeric complexes BCDX2 (RAD51B-RAD51C-RAD51D-XRCC2) is hypothesized to stimulate RAD51 foci formation. I used three single-molecule fluorescence tools to investigate how BCDX2 affects the RAD51 binding. Using fluorescently labeled protein and zero-mode waveguides, BCDX2 binding to DNA was found to be dynamic and reduced by RAD51. Single-molecule fluorescence resonance energy transfer (FRET) showed that BCDX2 does not alter the DNA extension property of RAD51 on single-strand DNA (ssDNA) or double-strand DNA (dsDNA). However, protein-induced fluorescence enhancement (PIFE) results showed that BCDX2 increased the PIFE effect of RAD51 on dsDNA but not ssDNA in the presence of ATP, in a time-dependent manner. This PIFE increase is potentially linked to ATP hydrolysis. These observations provide new information to elucidate the roles of BCDX2 in homologous recombination. |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/84479 |
DOI: | 10.6342/NTU202203886 |
全文授權: | 同意授權(限校園內公開) |
電子全文公開日期: | 2024-09-30 |
顯示於系所單位: | 化學系 |
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