表達純化全長 XIAP來檢測 XIAP:CASP7 的可逆抑制劑

Abstract

X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP) 抑制caspase-3 (CASP3)、7 (CASP7) 和 9，進而阻止細胞凋亡。已在化療抗性癌細胞中發現 XIAP 有過表達的現象。因此，已經開發了幾種小分子的 XIAP 拮抗劑和 SMAC 的模擬物來抑制 XIAP 與這些caspase之間的蛋白質相互作用以殺死腫瘤細胞。XIAP 利用第二個重複 (BIR2) 結構域和 BIR1 和 BIR2 之間的linker來結合並抑制內在凋亡途徑中的 CASP3/7。由這些化合物對缺乏 XIAP:CASP3 和XIAP:CASP7 之間的選擇性，其中一些化合物可能對細胞有毒性。我們之前報導了一種策略，通過選擇性結合CASP7 來破壞 XIAP:CASP7 複合物而不是 XIAP:CASP3，因此該化合物殺死了由化學療法引起的 CASP3 表現量低的 (CASP3/DR) 癌細胞，這些癌細胞中會累積很多 XIAP:CASP7。Shih-Hsun Chen 博士通過電腦模擬鑑定出可逆抑制劑與 CASP7 結合，釋放 XIAP 的linker-BIR2 結構域，並活化 CASP7 以殺死 CASP3/DR 癌細胞（Chen et al.，未發表）。因此，本篇論文旨在表達和純化全長 XIAP，以確認該化合物可以破壞全長 XIAP 和 CASP7 之間的相互作用。我通過使用 CASP7 活性測定、螢光猝滅試驗和 BIAcore 實驗證明了該化合物可以破壞全長 XIAP 與 CASP7 的相互作用。