探討在人類慢性骨髓性白血病細胞K562中由TRIM28介導的基因調控的分子機制

Abstract

TRIM28，也稱為KAP1或TIF1-β，它會參與癌細胞的發展。Trim28通過 N 端的RBCC域與KRAB-ZNF鋅指蛋白的KRAB域相互作用，RING finger含有 E3 連接酶活性。 為了研究TRIM28在白血病細胞系K562中的功能作用，我們通過 CRISP/Cas9 基因組編輯生成了TRIM28剔除(KO)突變體。我們發現胚胎ε- (HBE) 和胎兒γ- (HBG) 珠蛋白在TRIM28 KO 細胞中增加。通過 RNA-seq 分析，我們知道 SOX6 作為 β 蛋白抑制物在TRIM28 KO突變體中被減少。此外，TRIM28 KO K562細胞中SOX6的過表達將恢復對HBE和HBG的抑制。我們證明剔除TRIM28通過增加microRNA而減少SOX6。我們還試圖解釋TRIM28在細胞增殖、細胞週期轉變和細胞凋亡中起著關鍵的調節作用。用藥物處理細胞會使細胞進入分化階段，這與TRIM28 KO細胞相似。 同時，我們還通過免疫沉澱和 LC-MS/MS分析鑒定了TRIM28相互作用蛋白。我們發現TRIM28與GID/CTLH E3連接酶複合物（包括 YPEL5、RanBP9、RMND5A、MAEA、WDR26、RBP10、ARMC8、TWA1 和 GID4）相關。我們已經證明TRIM28直接與 YPEL5相互作用，並發現了TRIM28的相關相互作用域。此外，我們已經檢查了 TRIM28可能調節RMND5A和MAEA的蛋白質穩定性。我們對GID/CTLH複合物和 TRIM28的E3連接酶活性的相互調節如何控制它們的底物穩定性感興趣。綜上所述，我們將從基因表達和蛋白質穩定性調控方面闡明TRIM28如何影響血癌細胞的生長和分化。