探討參與非小型肺癌細胞黏著信號傳遞的磷酸酶PTPRA之受體

Abstract

在此研究中，我試圖通過將蛋白酪胺酸磷酸酶受體型A（PTPRA）敲除和對照組細胞的比較來分析鑒定非小型肺癌細胞（NCI- H1975）中的PTPRA底物。當非小型肺癌細胞的PTPRA蛋白被敲除後，我發現細胞的貼附性跟對照組相較起來變得比較差，因此這個原因驅使我從細胞黏附的方向下去尋找PTPRA之底物。首先，我利用西方式點墨法和流式細胞術來比較對照組及PTPRA KO組細胞之上游整合素（Integrins）的表現量著手。透過實驗，我們發現對照組及PTPRA KO組細胞之間的整合素表現量幾乎沒有區別。接下來，我選用了曾經有被文獻報導過跟細胞貼附相關的PTPRA底物之蛋白來比較對照組和PTPRA KO組細胞的蛋白質酪胺酸磷酸化之間的差異。結果，我發現PTPRA KO細胞的FAK及P130Cas蛋白磷酸化表現量與對照細胞相較之下比較高，這個狀況意味著這些蛋白可能為PTPRA下游之效應物。緊接著，我利用酪胺酸磷酸化蛋白的免疫沈澱法及蛋白質組學分析法去鑒定PTPRA之底物。我觀察到PTPRA KO細胞在60 kDa左右大小的位置相較於對照組表現出比較強烈的訊號，所以我們決定探討這個位置的未知蛋白。透過質譜分析，我們成功找到了數個跟細胞貼附相關，而且可能在PTPRA KO細胞中酪胺酸磷酸化較為強烈的蛋白。綜觀以上結果，本研究揭示了數個可能為PTPRA底物的蛋白或許可以解釋PTPRA KO的表型，同時未來也值得去做更深入的探討。