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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/78170
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DC 欄位 | 值 | 語言 |
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dc.contributor.advisor | 張麗冠 | |
dc.contributor.author | Tse-Yao Chen | en |
dc.contributor.author | 陳則堯 | zh_TW |
dc.date.accessioned | 2021-07-11T14:44:35Z | - |
dc.date.available | 2021-10-14 | |
dc.date.copyright | 2016-10-14 | |
dc.date.issued | 2016 | |
dc.date.submitted | 2016-08-02 | |
dc.identifier.uri | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/78170 | - |
dc.description.abstract | EB病毒 (Epstein-Barr Virus),屬於皰疹病毒科γ亞科,其生活史包括潛伏期 (latency) 與溶裂期 (lytic cycle)。病毒在進入溶裂期後會大量表現病毒基因,複製遺傳物質並組裝成為病毒顆粒,此過程中外鞘殼體 (capsid) 的組裝是非常重要的步驟。BORF1是EB病毒的次要外鞘蛋白質 (minor capsid protein),能與BDLF1形成三聚體 (triplex) 並引導其餘的外鞘蛋白質進入細胞核內進行組裝。Tripartite-motif 5 alpha (TRIM5α) 是反轉錄病毒的限制因子 (restriction factor),本實驗室先前研究發現TRIM5α能與BORF1直接結合,並利用其E3連接酶 (E3 ligase) 活性催化BORF1的泛素化修飾使其穩定性下降,進而抑制病毒溶裂期的發展。本研究首先證明TRIM5α B30.2功能區上的surface patch區域對其與EB病毒外鞘蛋白質BORF1的結合相當重要。接著觀察BORF1泛素化修飾的情形,顯示lysine 114為其上重要的泛素化修飾位置,若突變會提昇BORF1蛋白質的穩定性。TRIM5α亦能催化BORF1的K63鍵結長鏈泛素化修飾,顯示其降解可能與選擇性自噬作用有關。本研究進一步發現選擇性自噬作用的受體p62/sequestosome 1 (SQSTM1) 能透過辨認BORF1上的泛素化修飾而與其結合。此外,若抑制溶酶體 (lysosome) 活性則會使受泛素化修飾的BORF1累積,並提昇與p62的結合量。最後,若以siRNA抑制細胞中p62的含量,則BORF1的表現量會上升。綜合以上結果,本研究發現TRIM5α能與p62共同作用,透過選擇性自噬作用降解BORF1。 | zh_TW |
dc.description.abstract | Epstein-Barr virus (EBV) is a human herpesvirus with two distinct life cycles, latency and lytic cycle. During the lytic cycle, it encodes proteins that are involved in viral lytic DNA replication, capsid assembly and maturation. BORF1, a minor capsid protein of EBV, forms a triplex with BDLF1 and recruits other capsids into the nucleus for capsid assembly. Tripartite-motif 5 alpha (TRIM5α) is a restriction factor with the activity of ubiquitin E3 ligase. Previous study indicated that TRIM5α binds to BORF1 and enhances its ubiquitination, thus inhibiting lytic progression. This study demonstrated the surface patch region on B30.2 in TRIM5α is responsible for the interaction with BORF1. Moreover, lysine 114 of BORF1 is the major ubiquitination site. Mutating Lys-114 stabilizes BORF1. TRIM5α also promotes K63-linked poly ubiquitination of BORF1, which implies the possibility of involvement of autophagy in this process. This study reveals that the cargo receptor of selective autophagy, p62/sequestosome 1 (SQSTM1), recognizes the K63-linked poly ubiquitin chain on BORF1 and target it for autophagic degradation. Inhibition of lysosome activity causes the accumulation of ubiquitinated BORF1, and the interaction between p62 and BORF1 is evident. Finally, knockdown of p62 enhances the expression of BORF1. Taken together, this study demonstrates that TRIM5α functions concordantly with p62 and destabilizes BORF1 via autophagic degradation. | en |
dc.description.provenance | Made available in DSpace on 2021-07-11T14:44:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ntu-105-R03b22010-1.pdf: 37359744 bytes, checksum: 6d938140eddd936b37e2789161187596 (MD5) Previous issue date: 2016 | en |
dc.description.tableofcontents | 致謝 i
中文摘要 ii Abstract iii 目錄 iv 圖目錄 vii 表目錄 viii 前言 1 一、 Epstein-Barr virus (EB病毒) 的發現與其相關疾病 1 二、 EB病毒的遺傳物質組成與結構特性 1 三、 EB病毒的生活史 2 四、 皰疹病毒的外鞘蛋白質 4 五、 EB病毒的外鞘蛋白質 5 六、 泛素與泛素化修飾 (Ubiquitin and ubiquitination) 6 七、 類泛素 (Small ubiquitin-like modifier, SUMO) 7 八、 病毒外鞘蛋白質的泛素化與類泛素化修飾 9 九、 TRIM5α蛋白質 11 十、 TRIM5α限制反轉錄病毒的機制 12 十一、 自噬作用 (Autophagy) 14 十二、 p62/SQSTM1蛋白質 16 研究目的 18 材料與方法 19 一、 細胞株 19 二、 細菌 19 三、 質體與抗體 19 四、 質體DNA的萃取 19 五、 細胞轉染 19 六、 免疫沉澱分析 (Immunoprecipitation, IP) 20 七、 變性免疫沉澱分析 (Denature immunoprecipitation, denature IP) 20 八、 西方點墨法分析 (Western blot) 20 九、 免疫螢光染色分析 (Immunofluorescence analysis) 21 十、 蛋白質穩定性分析 21 十一、 以shRNA抑制蛋白質表現 22 結果 23 一、 TRIM5α SP突變對其與BORF1結合的影響 23 二、 泛素化與類泛素化修飾對BORF1穩定性的影響 24 三、 p62與BORF1在細胞內的結合 26 四、 p62與BORF1在細胞內的分布位置 27 五、 選擇性自噬作用對BORF1穩定性的影響 27 討論 30 圖表 35 參考文獻 54 附錄 78 附錄1、EB病毒的生活史 78 附錄2、HSV-1外鞘殼體的組裝 79 附錄3、泛素連結系統 80 附錄4、SUMO-targeted ubiquitin ligases (STUbLs) 的作用機制 81 附錄5、選擇性自噬作用機制 82 附錄6、TRIM5α做為自噬作用受體 83 附錄7、TRIM5α對EB病毒溶裂期的影響 84 | |
dc.language.iso | zh-TW | |
dc.title | 自噬作用對TRIM5α調控EB病毒外鞘蛋白質BORF1的影響 | zh_TW |
dc.title | Role of autophagy in the regulation of BORF1 of Epstein-Barr virus by TRIM5α | en |
dc.type | Thesis | |
dc.date.schoolyear | 104-2 | |
dc.description.degree | 碩士 | |
dc.contributor.oralexamcommittee | 劉世東,莊健盈,張世宗 | |
dc.subject.keyword | Epstein-Barr Virus (EB 病毒),外鞘蛋白質,BORF1,TRIM5α,泛素化修飾,p62,自噬作用, | zh_TW |
dc.subject.keyword | Epstein-Barr Virus (EBV),capsid proteins,BORF1,TRIM5α,ubiquitination,p62,autophagy, | en |
dc.relation.page | 84 | |
dc.identifier.doi | 10.6342/NTU201601599 | |
dc.rights.note | 有償授權 | |
dc.date.accepted | 2016-08-02 | |
dc.contributor.author-college | 生命科學院 | zh_TW |
dc.contributor.author-dept | 生化科技學系 | zh_TW |
顯示於系所單位: | 生化科技學系 |
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