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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/76009
標題: | 轉位子 Tn 917 衍生物之構築及其在枯草桿菌的應用 Construction and Application of a Tn917 Derivative for the Purpose of Mutagenesis and Cloning in Bacillus subtilis |
作者: | 張麗冠 |
出版年 : | 1993 |
學位: | 碩士 |
摘要: | 轉位子 Tn917 首先在Streptococcus faecalis 發現,目前已知可以在草蘭氏陽性菌如Streptococcus, Staphylococcus及 Bacillus 中發生轉位作用。在枯草桿菌( Bacillus subtilis ) 中,由 Tn917 所建立的基因突變系統一直適用於枯草桿菌的基因選殖。但是這個選殖系統涉及一個雙交叉作用( double crossing-over )的過程,相當耗費時間。因此嘗試構築一個 Th917 的衍生物( T n917acl ) ,將 Tn917 內部的基因 tnpA 和 tnpR 放置在二個反向重覆序列( inverted repeats )的外部,並將大腸桿菌( E.coli )的 pBR322 序列和抗 chloramphenicol 的抗性基因放置在二個反向重覆序列的內部。由 DNA 序列分析及雜交作用證明 Tn917acl 可以在枯草桿菌中發生轉位作用。利用 Tn917acl 作為選殖基因的工具,應用在枯草桿菌 F29-3 中,成功地篩選得到 13 株不產生豐原素( fengycin )的突變株,並證明是由 Tn917acl 插入豐原素的合成基因所造成的。 Transposon Tn917 has been used as a tool for the mutagenesis and cloning of Bacillus subtilis genes. The mutagenesis and cloning procedure usually involves transformation of a temperature-sensitive plasmid carrying Tn917; selection of Tn917 insertional mutants at high temperature; exchange Tn917 sequence with a ColE1-containing fragment by double crossing-over. To simplify this procedure, I constructed a Tn917 derivative, Tn9l7acl, containing only the inverted repeats of Tn917, a res site, a ColE ori, a chloramphenicol-resistant gene, and an ampicillin-resistant gene. This transposon Tn9l7acl can transpose in B. subtilis, if a tnpA and tnpR of Tn917 are supplied in cis. Using this transposon, I have isolated 13 fengycin-minus mutants and cloned the DNA fragments flanking the transposon inserted sites in B. subtilis F29-3. |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/76009 |
全文授權: | 未授權 |
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