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DC 欄位 | 值 | 語言 |
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dc.contributor.advisor | 周晉澄(Chin-Cheng Chou) | |
dc.contributor.author | Ya-Chih Huang | en |
dc.contributor.author | 黃雅稚 | zh_TW |
dc.date.accessioned | 2021-06-17T06:00:29Z | - |
dc.date.available | 2022-02-15 | |
dc.date.copyright | 2019-02-15 | |
dc.date.issued | 2019 | |
dc.date.submitted | 2019-02-12 | |
dc.identifier.uri | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/71424 | - |
dc.description.abstract | 假中間葡萄球菌 (Staphylococcus pseudintermedius)是引起犬隻膿皮症的伺機性致病菌。近年來,假中間葡萄球菌藉由犬隻造成人類感染的病例越來越多。假中間葡萄球菌引起的軟組織感染(soft-tissue infections, STI)是典型的生物膜相關感染性疾病,使用常規抗生素治療效果有限。此外,最近由耐甲氧西林假中間葡萄球菌(methicillin-resistant S. pseudintermedius, MRSP)所引起的軟組織感染也在犬隻和人類中迅速出現;因此,了解假中間葡萄球菌的致病機制用於開發有效預防及治療假中間葡萄球菌引起感染的策略是非常急迫且必要的。假中間葡萄球菌的生化特性與金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)相似,但目前對於假中間葡萄球菌致病機轉的了解仍十分有限。在金黃色葡萄球菌中,葡萄球菌附屬基因調控系統 accessory gene regulator (agr),是一種群體感應系統也是雙分子調控系統,能調控金黃色葡萄球菌造成疾病的毒力因子表現,但agr在假中間葡萄球菌致病機制中的作用仍不清楚。因此,本研究探討了不同agr分型的假中間葡萄球菌引起軟組織感染的致病特性。為了研究假中間葡萄球菌引起皮膚感染的致病機轉,我們建立小鼠膿皮症模式。本研究依據agr分型,將47株臨床的耐甲氧西林假中間葡萄球菌分離株分為4型,分別為第 I 型(52%)、 第 II 型 (2%)、 第 III 型(35%)、 第 IV 型(10%)。在小鼠活體試驗中,耐甲氧西林假中間葡萄球菌分離株中的agr第III型和第IV型顯示出較強的皮膚感染能力。而耐甲氧西林假中間葡萄球菌抵抗嗜中性白血球毒殺的能力和形成生物膜的能力與耐甲氧西林假中間葡萄球菌所引起皮膚膿腫的致病性無關。在細胞毒性測定、細胞粘附和細胞侵入試驗的結果顯示,agr第III型和第IV型的分離株顯著優於其他agr分型的耐甲氧西林假中間葡萄球菌。綜合來說,假中間葡萄球菌分離株中的agr第III型和第IV型顯示出更強的黏附、侵入和損傷宿主細胞的能力,而這些細菌毒性有助於導致膿皮症的產生。 | zh_TW |
dc.description.abstract | Staphylococcus pseudintermedius is an opportunistic pathogen for causing pyoderma in dogs. The number of human cases with S. pseudintermedius infection, mainly acquired from dogs, is also increasing during recent years. S. pseudintermedius-induced soft tissue infection (STI) is a typical biofilm-related infectious disease, which is refractory to routine antibiotic treatment. In addition, methicillin resistance S. pseudintermedius-induced STIs in dogs and human are also rapidly emerging recently. Therefore, to understand the pathogenesis of S. pseudintermedius infection for developing the effective strategies for the prevention and treatment of S. pseudintermedius-induced infections is imperative. The biochemical properties of S. pseudintermedius are similar to those of Staphylococcus aureus, but the current understanding of the pathogenesis of S. pseudintermedius is still limited. In S. aureus, accessory gene regulator (agr) system, which is a quorum sensing and a two-component system, mediate S. aureus virulence for causing diseases, but the role of agr in the pathogenesis of S. pseudintermedius is still unknown. Therefore, in this study, the virulence of different agr types of S. pseudintermedius for causing STI was characterized. To investigate the pathogenesis of S. pseudintermedius-induced skin infection, the mouse pyoderma model was established. Fourty-seven clinical MRSP isolates were classified into four types by agr classification, namely type I (52%), type II (2%), type III (35%) and type IV (10%). The agr type III and type IV of MRSP isolates showed stronger ability to cause skin infection in vivo. The abilities of MRSP to resist neutrophil killing and to form the biofilm are not correlated to the virulence of MRSP for causing skin abscesses. The results of cytotoxicity assay, cell adhesion and cell invasion tests showed that agr type III and type IV isolates perform significantly better than other agr types of MRSP for causing skin infection. Taken together, agr type III and type IV of S. pseudintermedius isolates show greater abilities to adhere, invade and damage host cells, which contribute to bacterial virulence for causing pyoderma. | en |
dc.description.provenance | Made available in DSpace on 2021-06-17T06:00:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ntu-108-R05629007-1.pdf: 2577852 bytes, checksum: 6b0d16a91891150627a1f47c96f09b17 (MD5) Previous issue date: 2019 | en |
dc.description.tableofcontents | 口試委員會審定書i
誌謝ii 中文摘要iv 英文摘要vi 目錄viii 圖目錄xii 表目錄xiii 第一章 文獻探討1 第一節 犬隻膿皮症 (Canine pyoderma) 1 一、 膿皮症的介紹1 第二節 膿皮症病原Staphylococcus pseudintermediu 1 一、 Staphylococcus pseudintermedius 1 二、 菌株鑑定與分型 2 三、 Staphylococcus pseudintermedius毒力因子4 四、 Methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius (MRSP) 6 五、 致病性6 六、 人畜共通傳染7 第三節 細菌生物膜8 一、 細菌生物膜 8 二、 葡萄球菌生物膜形成機制9 第四節 雙分子調控系統(Two-component regulatory systems). 10 一、 葡萄球菌雙因子調控系統10 二、 Accessory gene regulator (agr) system 葡萄球菌附屬基因調控系統10 三、 Quorum sensing (QS) System與致病性12 第五節 研究目的 13 第二章 實驗材料與方法14 第一節 實驗材料14 第二節 S. pseudintermedius菌株來源、培養 15 第三節 MRSP菌株確認 15 第四節 MRSP菌株脈衝式電泳分型15 第五節 MRSP菌株之agr分型 17 第六節 評估在in vivo中不同agr分型菌株的毒力 17 一、 老鼠皮膚感染模式的建立與細菌處理 17 二、 檢體處理與細菌培養 17 第七節 評估in vitro中不同agr分型菌株毒力 18 一、 生物膜形成能力測定 18 二、 製備人類多形核白血球及噬中性白血球殺菌能力試驗 18 三、 H2O2殺菌能力試驗 19 四、 溶血活性試驗 19 五、 細胞毒殺、黏附及入侵試驗 20 1. 細胞解凍及繼代 20 2. 細胞毒殺試驗 20 3. 細胞黏附試驗 21 4. 細胞入侵試驗 21 六、 細菌擴散能力22 七、 萃取RNA及基因表達分析 22 1. 萃取RNA 22 2. cDNA製備 23 3. 利用q-PCR基因表達分析 23 八、 統計分析 24 第三章 結果25 第一節 各分離株之Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE)親源性25 第二節 各分離株之agr 分型27 第三節 評估在in vivo中不同agr分型菌株毒力表現29 一、 建立S. pseudintermedius HKU10-03老鼠皮膚感染模式 29 二、 比較不同agr分型MRSP分離株於老鼠皮膚感染模式的表現 32 第四節 評估在in vitro中不同agr分型菌株的毒力表現34 一、 不同agr分型菌株生物膜形成能力 34 二、 不同agr分型菌株抵抗嗜中性白血球殺菌的能力 36 三、 比較不同agr分型菌株抵抗H2O2殺菌的能力 38 四、 比較不同agr分型菌株的溶血能力 39 五、 比較不同agr分型菌株的細菌擴散能力 40 六、 不同agr分型菌株誘導細胞毒素對於HaCaT角質細胞與SAS上皮細胞的影響 41 七、 比較不同agr分型菌株對於HaCaT角質細胞及SAS 上皮細胞黏附與侵入能力 43 八、 Leukocidin、Exfoliate toxin、Protein A、Fibronectin binding protein及RNAIII在各agr分型菌株中的基因表現 45 第四章 討論47 一、 S. pseudintermedius之動物模式的建立47 二、 S. pseudintermedius在PFGE實驗上的問題47 三、 MRSP之分型表現47 四、 不同agr分型與疾病之間的關係48 五、 不同agr分型的分離株生物膜形成及抵禦噬中性白血球毒殺對於致病機轉的影響.49 六、 S. pseudintermedius毒力表現對於角質細胞與上皮細胞的影響50 七、 細菌擴散能力與agr調控系統的關係50 八、 S. pseudintermedius毒力基因表現與毒力因子調控差異51 九、 S. pseudintermedius之agr基因剔除之困難與限制52 第五章 總結54 參考文獻55 附錄70 圖目錄 圖一 生物膜形成8 圖二 S. aureus的葡萄球菌附屬基因調控系統12 圖三 47株MRSP菌株利用ApaI進行切割分析PFGE同源性樹狀圖26 圖四 建立老鼠皮膚感染模式30 圖五 S. pseudintermedius誘導BALB / c老鼠皮膚感染試驗31 圖六 不同 agr分型的MRSP分離株在老鼠皮膚感染模型中的表現33 圖七 比較不同agr分型菌株生物膜形成的能力35 圖八 比較不同agr分型菌株與嗜中性白血球作用後的存活率37 圖九 比較不同agr分型菌株抵抗H2O2的能力分析38 圖十 比較不同agr分型菌株溶血活性差異 39 圖十一 比較不同agr分型菌株在0.24%培養基的菌落擴散能力40 圖十二 比較不同agr分型菌株對於(A)HacaT角質細胞和(B)SAS鱗狀上皮細胞細胞的毒性影響 42 圖十三 比較不同agr分型菌株對於細胞黏附與侵入的差異 44 圖十四 比較不同agr分型菌株 leukocidin LukF-I (A)、exfoliate toxin siet (B)、protein A spsQ (C)、Fibronectin binding protein spsE (D) 及RNAIII (E)基因表現的能力46 附錄圖一 48株S. pseudintermedius之PFGE分型與各基因型及表現型整合 74 附錄圖一 S. pseudintermedius 菌株RNA電泳分析膠圖 75 附錄圖二 Cell line的細胞型態顯示圖75 表目錄 表一 PCR Primer 14 表二 Q-PCR Primer 14 表三 47株MRSP分離株與標準菌株之agr分型結果27 表四 不同agr分型之菌株分離部位分布28 表五 47株MRSP分離株之agr分型、SCCmec分型及dru分型比對 28 表六 47株MRSP分離株與標準菌株之生物膜形成能力35 附錄表一 實驗材料 70 附錄表二 實驗材料 71 附錄表三 48株S. pseudintermedius來源背景72 附錄表四 48株S. pseudintermedius之PFGE分型、SCCmec分型、dru分型、採樣部位、生物膜形成能力及agr分型73 | |
dc.language.iso | zh-TW | |
dc.title | 探討Staphylococcus pseudintermedius 之accessory
gene regulator (agr) 不同基因分型於毒力因子表現及生物膜形成所扮演的角色 | zh_TW |
dc.title | The role of the accessory gene regulator (agr) genotypes in virulence gene expression and biofilm formation of Staphylococcus pseudintermedius | en |
dc.type | Thesis | |
dc.date.schoolyear | 107-1 | |
dc.description.degree | 碩士 | |
dc.contributor.coadvisor | 鍾筱菁(Chiau-Jing Jung) | |
dc.contributor.oralexamcommittee | 張照勤(Chao-chin Chang),葉光勝(Kuang-Sheng Yeh),陳媺玫(Meei-Mei Chen) | |
dc.subject.keyword | 假中間葡萄球菌,耐甲氧西林假中間葡萄球菌,葡萄球菌附屬基因調控系統,膿皮症, | zh_TW |
dc.subject.keyword | S. pseudintermedius,methicillin-resistant S. pseudintermedius (MRSP),accessory gene regulator (agr) system,pyoderma, | en |
dc.relation.page | 75 | |
dc.identifier.doi | 10.6342/NTU201900439 | |
dc.rights.note | 有償授權 | |
dc.date.accepted | 2019-02-12 | |
dc.contributor.author-college | 獸醫專業學院 | zh_TW |
dc.contributor.author-dept | 獸醫學研究所 | zh_TW |
顯示於系所單位: | 獸醫學系 |
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