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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/71420
標題: | 光聲鈣離子影像的可行性研究 Feasibility Study of Photoacoustic Calcium Imaging |
作者: | Sheng-Hong Chen 陳盛鴻 |
指導教授: | 李百祺(Pai-Chi Li) |
關鍵字: | 光聲顯微鏡,鈣,細胞功能,功能性影像, Photoacoustic microscopy,calcium,cell Function,functional image, |
出版年 : | 2019 |
學位: | 碩士 |
摘要: | 在過去有許多文獻利用光學顯微技術來呈現鈣離子在神經元或細胞中的濃度變化,然而不論是常見的雙光子螢光顯微鏡還是光場顯微鏡,都因受限於對組織的穿透深度(少於200 µM),故無法呈現較深層的影像。光聲影像系統具有高解析度及高組織穿透深度的優勢,近年來被廣泛用於生物組織觀測上,但在鈣離子濃度的量測上始終受限於鈣離子的光吸收度。本研究提出一個利用光聲效應配合特定鈣離子對比劑的方法來觀察細胞內鈣離子濃度變化,本論文探討一常用於光學系統的染色劑偶氮氯膦(Chlorophosphonazo III,CPZ-III)作為光聲-鈣離子濃度的顯影對比劑之可行性。透過仿體光聲實驗,我們確立了在超音波探頭之中心頻率為 8 MHz 並搭配 150 µM CPZ-III,在鈣離子濃度為25 µM - 2 mM 之間,可以有效地觀察到光聲訊號隨鈣離子濃度的上升而增強。我們亦將該技術應用在腫瘤細胞實驗中,並嘗試建立三維細胞功能性影像。我們規劃透過外加藥物(Thapsigargin)短暫的使腫瘤細胞中鈣離子濃度增加,同時觀察光聲訊號強度是否與細胞中鈣離子濃度的變化一致。雖然實驗結果顯示在細胞穩定狀態下光聲訊號強度會隨著時間而衰退,但在外加藥物以及高濃度鈣離子濃度的刺激下,光聲訊號強度仍各別有兩倍以及三倍以上的提升,趨勢符合本研究對於細胞中鈣離子濃度變化的推測。對於未來的工作,將此技術應用在臨床及研究上可以作為腫瘤球診斷、輔助性治療以及藥物研發上,此外,我們預計可以透過基因編碼鈣對比劑/蛋白鈣對比劑GCaMP作為鈣離子光聲對比劑來改善光聲訊號強度隨著時間衰退的問題。 Optical imaging systems, such as the two-photon microscope and the light-field microscope, have been widely used to quantify calcium concentration in the cell. However, none of the existing systems can image the calcium concentration deeper than 200 µM due to the limitation of the light penetration depth. The higher resolution and deeper penetration depth can be benefited by exploiting photoacoustics (PA), but the light-absorption limits the measurements of the calcium concentration in the cell. This study investigated the potential improvement of using PA microscopy to measuring calcium concentration by introducing a PA contrast agent (Chlorophosphonazo III, CPZ-III). According to the phantom experiments, a concentration from the range of 25 µM to 2 mM can be successfully measured by using an 8 MHz ultrasound transducer and 150 µM CPZ-III. A 3D calcium-concentration map can be obtained by using the proposed method. The experimental results show that there is a 3-fold improvement on the PA signal, and the tendency concentration is consistent with our expectations. Future works will focus on using GCaMP calcium contrast agent to address the attenuation of the calcium-PA signal. |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/71420 |
DOI: | 10.6342/NTU201900461 |
全文授權: | 有償授權 |
顯示於系所單位: | 生醫電子與資訊學研究所 |
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