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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/5009
標題: | 探討在輔助型T細胞中酪胺酸磷酸化之c-Maf對於介白素四與二十一啟動子的結合機轉 Recruitment of tyrosine-phosphorylated c-Maf to Il4 and Il21 promoters in helper T cells |
作者: | Yu-Hsien Lin 林育仙 |
指導教授: | 繆希椿(Shi-Chuen Miaw) |
關鍵字: | 輔助型T細胞,介白素四,介白素二十一, c-Maf,Th2,Th17,IL-4,IL-21, |
出版年 : | 2014 |
學位: | 碩士 |
摘要: | Maf家族的蛋白質,參與了細胞當中各種不同的生物反應與機制,包括水晶體的發育,免疫細胞的分化以及腫瘤的形成。c-Maf是large Maf家族成員的一員,在免疫系統中扮演著多樣且十分重要的角色。c-Maf被發現可以在第二型輔助性T細胞中轉錄活化介白素四的表現,也可在第十七型輔助性T細胞中轉錄活化介白素二十一的表現。在我們之前的研究當中發現,c-Maf在第21,92,131號酪胺酸的位置可以被磷酸化。而且在這三個位置的磷酸化有助於c-Maf結合到介白素四的啟動子,也可促進第二型輔助性T細胞分泌介白素四。在本篇當中,為了進一步了解c-Maf 在第十七型輔助性T細胞中,對介白素二十一的調控。我們首先確認了c-Maf可以在第十七型輔助性T細胞中被磷酸化。接著我們將野生型c-Maf(WT c-Maf)和磷酸化位置被突變的c-Maf(Y3F c-MAf)過度表現在第十七型輔助性T細胞。發現介白素二十一的表現在Y3F c-Maf當中有下降的趨勢。我們也同時使用染色質免疫沉澱分析,發現相較於WT c-Maf,Y3F c-Maf結合到介白素二十一的啟動子的能力較差。總結來說,我們發現c-Maf的磷酸化會影響c-Maf結合到啟動子的能力,進而也影響到對介白素轉錄活化的能力。 Maf (Musculoaponeurotic fibrosarcoma) proteins are involved in a variety of biological processes such as oncogenesis, lens development and differentiation. c-Maf, one of the large Maf proteins, plays important roles in immune system. c-Maf is the specific transcription factor of the IL-4 and IL-21 genes in type 2 helper T cell (Th2) and type 17 helper T cell (Th17), respectively. In our previous study, we found that c-Maf undergoes phosphorylation, a post-translational modification, in Th2 cells. The Tyrosine 21, 92, and 131 residues are identified as sites for tyrosine phosphorylation in c-Maf. We previously reported that the tyrosine-phosphorylation of c-Maf enhances its transactivity on IL-4 gene expression in Th2 cells. To understand the regulation of IL-21 cytokine gene expression by tyrosine-phosphorylation of c-Maf in Th17 cells, we showed c-Maf is subjected to tyrosine-phosphorylation in Th17 cells. We introduced WT c-Maf or c-Maf mutant carrying deficiency in tyrosine-phosphorylation (Y3F) into primary murine Th17 cells via retrovirus transduction and measured the gene expression of IL-21 with quantitive PCR and ELISA assay. We demonstrated that IL-21 production is reduced by c-Maf Y3F. Importantly, We performed chromatin immunoprecipitation to analyzed the binding ability of WT c-Maf or c-Maf Y3F to IL-21 promoter and found that c-Maf Y3F binds relatively weakly to IL-21 promoter compared to WT c-Maf. |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/5009 |
全文授權: | 同意授權(全球公開) |
顯示於系所單位: | 免疫學研究所 |
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