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  1. NTU Theses and Dissertations Repository
  2. 生命科學院
  3. 生化科技學系
請用此 Handle URI 來引用此文件: http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/48889
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DC 欄位值語言
dc.contributor.advisor林甫容
dc.contributor.authorSzu-Pei Yuen
dc.contributor.author余思霈zh_TW
dc.date.accessioned2021-06-15T11:10:57Z-
dc.date.available2021-09-13
dc.date.copyright2016-09-13
dc.date.issued2016
dc.date.submitted2016-08-30
dc.identifier.urihttp://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/48889-
dc.description.abstract子代的代謝狀態會受母親所提供的子宮環境而影響,且這樣的影響可能會造成子代成年後健康,也就是所謂胎兒規劃 (fetal programming) 假說。
過去的文獻指出,懷孕期間母體若攝入過多脂肪及膽固醇而引起高血脂症,會提高子代成年後出現心血管疾病以及脂肪肝的發生率,但詳細的機制目前還不清楚。故本實驗欲建立一個穩定的高膽固醇血症動物模式,研究母體營養對其子代成年期健康之影響及其可能分子機制。我們選用對於高油脂高膽固醇飲食有高敏感性的 apolipoprotein E 剔除 (ApoE-/-) 小鼠做為模式動物,在母鼠孕期前、孕期及哺乳期進行高油脂高膽固醇飲食處理,並在子代斷奶後持續以飲食誘導,欲觀察子代在發育早期處於高膽固醇的環境所造成的健康影響。
本研究中將孕鼠分為高油脂高膽固醇 (Western diet, WD) 組及正常飲食組 (Control diet, CD)。WD 組及 CD 組子代斷奶後皆餵食 Western diet,分別為 W-W 組以及 C-W 組,一共生 3 胎子代。本研究測量動脈粥狀硬化及脂質代謝評量指標: 主動脈弓粥狀硬化斑塊、體重組織重量、血液及肝臟脂肪含量、肝臟及脂肪之病理切片。W-W 組子代在 3 週齡斷奶時,血清膽固醇及三酸甘油酯濃度顯著高於 C-W 組,但 8 周齡後兩組間沒有差異。23 周齡犧牲時,第一、二胎兩組肝臟脂肪含量無顯著差異,但 W-W 組子代有較嚴重的脂肪肝,其餘生理指標如動脈粥狀硬化斑塊面積比例、脂肪細胞大小的差異則不明顯。之後第三胎子代於 16 周齡犧牲,W-W 組子代比起 C-W 組,肝臟及脂肪重量顯著增加,肝臟膽固醇及三酸甘油酯含量顯著增加,肝臟中脂質合成的相關基因 Fasn、Acacb、Srebf1、Srebf2、Lipe 和Chpt1,以及脂質運輸相關基因 Abcg5 和 Abcg8 在 W-W 組子代比 C-W 組有較高的表現量。
綜合以上結果,母鼠孕期前後的高血膽固醇會造成子代成年後脂質在脂肪組織以及肝臟堆積,隨著年齡增長還可能演化為脂肪肝。而肝臟脂質堆積可能是與脂質合成以及運輸相關基因表現量提升有關。後續的研究將會著重於表觀遺傳如何影響此現象。
zh_TW
dc.description.abstractIn utero environment during embryonic and fetal development is associated with risk of diseases later in life. This concept of fetal programming is further supported by clinical and experimental studies. Previous studies demonstrate that maternal high fat diet intake during early development increase susceptibility to cardiovascular diseases and liver diseases in offspring. However, little is known about the molecular mechanisms underlying the impacts of maternal diet on offspring. We aim to setup a mouse model to characterize the effects of maternal hypercholesterolemia on the lipid metabolism of adult offspring.
Apolipoprotein E knockout (ApoE-/-) female mice were fed either a Western diet (WD) or a low-fat control diet (CD) before and during gestation and lactation. At weaning, the ApoE-/- offspring were all fed WD, generating two experimental groups: W-W and C-W offspring. Female mice gave birth to three litters. Among them, the offspring of litter 1 and 2 were analyzed at 23 weeks of age, and the offspring of litter 3 were investigated at 16 weeks of age. Biochemical analysis showed that the W-W offspring from litter 1 and 2 have a higher serum triglycerides (TG) and cholesterol levels than C-W offspring at weaning. However, there are no significant differences on hepatic TG and cholesterol levels, adipocyte area as well as the severity of atherosclerotic lesions between W-W and C-W offspring at 23 weeks of age. In contrast to the results from litter 1, and 2, more profound differences between two groups were observed in litter 3. The relative weight of liver, inguinal white adipose tissue (iWAT) and interscapular brown adipose tissue (iBAT) was significantly higher in W-W than in C-W offspring. Although there were no significant differences on the development of atherosclerotic lesions, W-W offspring from litter 3 showed hepatic steatosis combined with accumulation of hepatic TG and cholesterol in comparison with C-W group. This accumulation was associated with up-regulation of de novo lipid synthesis. Increased expressions of lipid synthesis related genes, including Fasn, Acacb, Lipe, Chpt1, Srebf1 and Srebf2 were observed in the livers of W-W offspring. In addition, the expression of cholesterol transport related genes, such as Abcg5 and Abcg8 was significantly higher in the livers of W-W in those of C-W offspring.
Taken together, our findings demonstrate that maternal hypercholesterolemia increase susceptibility to lipid accumulation in their adult offspring by augmenting hepatic lipid synthesis, which is mediated at least in part by increased expression of lipid synthesis and transport related genes. Future research will concentrate on epigenetic changes involved in this programming process.
en
dc.description.provenanceMade available in DSpace on 2021-06-15T11:10:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2016
en
dc.description.tableofcontents謝辭 i
中文摘要 i
Abstract iii
代號與縮寫對照表 v
總目錄 viii
圖目錄 xiii
表目錄 1
第一章 緒論 1
第一節 前言 1
第二節 文獻回顧 2
一、 脂質代謝相關疾病 2
1.1 高血脂症 2
1.2 動脈粥狀硬化 2
1.3 非酒精性脂肪肝 6
1.4 NAFLD 的脂質代謝 9
二、 成人疾病胎兒起源假說 12
三、 表觀遺傳 (Epigenetic) 13
3.1 組蛋白修飾 13
3.2 DNA 甲基化 14
3.3 microRNA 調節 15
四、 母親孕期高膽固醇血症對子代的影響 16
4.1 人類研究 16
4.2 動物研究 17
五、 ApoE 剔除小鼠 24
六、 脂質代謝途徑 26
6.1 膽固醇合成 26
6.2 脂質運輸與代謝 26
6.3 脂質代謝相關轉錄因子 29
第三節 實驗假說與實驗架構 32
一、 實驗假說 32
二、 實驗架構 32
第二章 母親高血脂症引發子代脂質代謝異常的可能成因 33
第一節 前言與實驗大綱 33
一、 前言 33
二、 實驗大綱 34
第二節 材料與方法 35
一、 ApoE-/- 母鼠誘發孕期高膽固醇血症 35
二、 飼料配製 36
2.1 高油脂高膽固醇飲食 (Western diet) 36
2.2 控制組飲食 (control diet) 36
三、 母鼠孕期及哺乳期高血膽固醇 38
四、 子代飼養 38
五、 血清中膽固醇之測定 38
六、 血清中 TG 之測定 38
七、 攝食量測定 39
八、 動物犧牲 39
九、 脂蛋白分布分析 39
十、 主動脈弓粥狀硬化斑塊分析 40
十一、 ORO 染色劑配製 40
十二、 肝臟脂質分析 41
12.1 肝脂萃取 41
12.2 肝膽固醇測定 41
12.3 肝 TG 測定 41
十三、 肝臟與脂肪 H & E 染色 41
十四、 脂肪組織細胞面積分析 42
十五、 肝臟 ORO 染色 42
15.1 冷凍切片 42
15.2 ORO 染色 42
十六、 肝臟脂質代謝相關基因表現分析 43
16.1 總RNA抽取 43
16.2 去除 DNA 43
16.3 Total RNA反轉錄為 cDNA 44
16.4 Quantitative Real-time PCR 44
十七、 統計分析 50
第三節 實驗結果 51
一、 母鼠懷孕前後飲食誘導之時間長、懷孕前後體重以及子代隻數變化 51
二、 母鼠懷孕前後以及哺乳期血清膽固醇變化 51
三、 三胎子代出生體重 52
四、 第一、二胎公鼠以及第一胎母鼠子代斷奶後體重變化 52
五、 第一胎公母鼠子代飼料利用與攝食量 52
六、 第一、二胎公鼠以及第一胎母鼠子代血脂濃度變化 53
七、 第一、二胎公鼠以及第一胎母鼠子代組織重量分析 53
八、 第一胎子代主動脈弓粥狀硬化斑塊分析 53
九、 第一胎子代肝臟切片以及第一、二胎公鼠和第一胎母鼠子代肝脂分析 54
十、 第一胎子代性腺脂肪組織切片 54
十一、 第三胎子代體重 54
十二、 第三胎子代血脂濃度變化與脂蛋白分布分析 55
十三、 第三胎子代組織重量分析 55
十四、 第三胎子代主動脈弓粥狀硬化斑塊分析 55
十五、 第三胎子代肝臟組織切片以及肝脂分析 56
十六、 第三胎公鼠 iWAT 組織切片及脂肪細胞面積分布分析 56
十七、 第三胎子代脂質代謝相關轉錄因子 mRNA表現 56
十八、 第三胎子代肝臟三酸甘油酯代謝相關 mRNA表現 57
十九、 第三胎子代肝臟膽固醇代謝相關 mRNA表現 57
二十、 第三胎子代肝臟膽固醇運輸相關 mRNA表現 57
二十一、 第三胎子代肝臟發炎相關 mRNA表現 58
第四節 討論 92
一、 母鼠孕期高膽固醇血症改變子代脂質代謝之動物模式 92
1.1 母親飲食 92
1.2 子代飲食 92
1.3 子代之間比較 93
二、 母親高血膽固醇影響子代脂質代謝情形 94
2.1 出生體重 94
2.2 斷奶後體重變化 95
2.3 斷奶後血脂變化 95
2.4 脂蛋白 96
2.5 動脈粥狀硬化 96
2.7 肝臟 97
三、 母親孕期高血脂症對子代基因的影響 98
3.1 TG 合成相關基因 98
3.2 膽固醇合成與運輸相關基因 99
3.3 發炎相關基因 100
3.4 與 NAFLD 基因表現情形比較 100
四、 綜合討論 101
第五節 結論 103
參考文獻 104
dc.language.isozh-TW
dc.title出生前與哺乳期西式飲食暴露對 ApoE-/- 小鼠脂質代謝之影響zh_TW
dc.titleEffects of prenatal and suckling exposure to Western diet on the lipid metabolism in ApoE-/- miceen
dc.typeThesis
dc.date.schoolyear104-2
dc.description.degree碩士
dc.contributor.oralexamcommittee黃青真,呂紹俊,張美玲,蘇慧敏
dc.subject.keyword高膽固醇血症,動脈粥狀硬化,脂肪肝變性,脂質代謝,胎兒規劃,zh_TW
dc.subject.keywordhypercholesterolemia,atherosclerosis,hepatic steatosis,lipid metabolism,fetal programming,en
dc.relation.page117
dc.identifier.doi10.6342/NTU201603569
dc.rights.note有償授權
dc.date.accepted2016-08-30
dc.contributor.author-college生命科學院zh_TW
dc.contributor.author-dept生化科技學系zh_TW
顯示於系所單位:生化科技學系

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