請用此 Handle URI 來引用此文件:
http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/40500
完整後設資料紀錄
DC 欄位 | 值 | 語言 |
---|---|---|
dc.contributor.advisor | 張紹光(Shao-Kuang Chang) | |
dc.contributor.author | Yu-Ching Wang | en |
dc.contributor.author | 王郁菁 | zh_TW |
dc.date.accessioned | 2021-06-14T16:49:26Z | - |
dc.date.issued | 2008 | |
dc.date.submitted | 2008-07-31 | |
dc.identifier.uri | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/40500 | - |
dc.description.abstract | 摘要
鮑氏不動桿菌(Acinetobacter baumannii;AB)為環境中伺機菌,常存在於健康人體皮膚表面,此菌亦為重要的院內病原菌,可造成包括:菌血症、肺炎、腦膜腦炎等具有高度死亡率的數種感染症,且廣泛使用抗生素治療,易使此菌對廣效性抗生素產生抗藥性,主要由於乙內醯胺酶之產生,導致治療上的窘境,也備受重視。在各動物族群中,目前僅於犬、貓與馬見相關報告。本研究自2006年6月至2007年5月由台灣北、中、南及東部地區之雞隻,分別採取810個氣管及共泄腔棉拭子樣本,培養於礦物培養基,再以改良式Leeds Acinetobacter Medium(MLAM)培養基分離目標菌株後;除經16S rRNA聚合酶鏈鎖反應外並利用擴增核糖體DNA限制性分析方法(amplified ribosomal DNA restriction analysis;ARDRA)進行基因型分析與鮑氏不動桿菌標準菌株(ATCC 19606)比對鑑定,結果共分離70/1620株(4.3%)鮑氏不動桿菌。北、中、南、東部地區的分離率分別為5%(15/312)、5.5%(21/384)、4.6%(32/692)及0.9%(2/232),以及至台北某一醫院收集73株病患分離之鮑氏不動桿菌;進行藥物敏感性試驗、偵測抗藥性基因與脈衝式電泳分析(pulsed-field gel electrophoresis;PFGE)。由藥物敏感性試驗結果得知,雞來源鮑氏不動桿菌對安比西林、安默西林、羥四環素均產生高等程度抗藥性(high-level resistance),但對人醫所使用的乙內醯胺類抗生素與乙內醯胺酶抑制劑合併製劑 (例:Unasyn 與Tazocin )、amikacin與carbapenems類藥物仍具有敏感性;而人分離菌株大部分為多重抗藥性菌株,62%(45/73)對胺基醣苷類與乙內醯胺類藥物包括meropenem皆產生抗藥性,除了可利斯汀與Unasyn 為具敏感性。將所分離之143株鮑氏不動桿菌分離株為基礎,根據藥物敏感試驗結果來探討抗藥性基因之相關性。隨即以聚合酶鏈鎖反應進行抗藥性基因之分析,經定序及與國外研究結果比對後,143株鮑氏不動桿菌人源(73株)與雞源(70 株)菌株中,人源菌株具blaTEM-1、blaSHV-18、blaOXA-51-like、blaOXA-58、blaOXA-72及blaAmpC基因,分別為82.3%、50.7%、100%、86.3% 、38.9%與100%;雞源菌株所具有之比例分別為75.7%、47.1%、100%、64.3%、8.6%與100%。因此,抗藥性基因與乙內醯胺類之抗藥性有很大之關係。運用脈衝式電泳分型分析來比較雞與人源菌株兩者間之關係,結果發現兩種來源之菌株間具有相同基因型,但抗藥性之演化應該是獨立發生。人類分離株抗藥性比例明顯比雞隻分離株高,人類分離株具有多重抗藥性,但其抗藥性並不源自雞隻。結果認為人類與雞隻鮑氏不動桿菌具有基因相關性,但是抗藥性之演化是各自獨立的。 | zh_TW |
dc.description.abstract | Abstract
Acinetobacter species is an opportunistic pathogen present in the environment, and also a common part of the normal skin flora in human. Acinetobacter baumannii has emerged as an important pathogen in nosocomial infection. It may cause serious infections such as bacteremia, pneumonia and meningitis that yields high rates of mortality and morbidity. Extensive use of antimicrobial chemotherapy within hospitals has contributed for the selection and the increase in the number of A. baumannii strains resistant to a wide range of antibiotics, mainly due to the products of β-lactamases. A. baumannii become to mutidrug resistant, and difficult to treatment. To date A. baumannii has only been associated with the dog, cat and horse. In this study, eight hundred and ten tracheal and cloaca swabs were collected from poultry farms from June 2006 to May 2007 in district regions of Taiwan. Mineral medium was used for isolation of A. baumanni strains. This Modified Leeds acinetobacter medium (MLAM) was used as the selective medium. The samples were identified not only by polymerase chain reaction but also by amplified ribosomal DNA restriction analysis. Of the sample collected 70/1620 strains (4.3 %) were isolated. The prevalence in the northern, middle, southern and eastern in regions were 5 % (15/312)、5.5 % (21/384)、4.6 % (32/692)and 0.9 % (2/232). A total of 73 Acinetobacter baumannii were consecutively collected from patient in regional hospital. The microdilution method results indicated the A. baumannii isolates were high resistant to ampicillin, amoxicillin and oxytetracycline but were sensitive to unasyn , amikacin and carbapenems of poultry. Most of human A.baumannii isolates had multidrug resistant bacteria . Forty-five isolate (62 %) were resistant to all aminoglycosides and beta-lactam antibiotic (include Meropenem), except susceptible to colistin and unasyn . TEM-, SHV-, and OXA-related enzymes and AmpC beta-lactamase were studied by PCR with 143 A. baumannii isolates recovered from chicken (n=70) and human (n=73) origin. By the results of sequencing and comparing with other previous studies, the percentage of β-lactamase gene in A. baumannii of humans and chickens are 82.3 % and 75.7 % in blaTEM-1, 50.7 % and 47.1 % in blaSHV-18, 100 % and 100 % in blaOXA-51-like, 86.3 % and 64.3 % in blaOXA-58 and 38.9 % and 8.6 % in blaOXA-72, 100 % and 100 % in blaAmpC. To determine the genetic relatedness among human and chicken isolates by pulsed field gel electrophoresis analysis. Clusters containing both human and chicken strains, as well as some strains that were closely related genetically. Human isolates were against more antimicrobials and had higher levels of resistance than chicken isolates. This study demonstrated that the A. baumannii isolates from human and chicken were genetically related, but the drug resistance for the two groups developed independently. . | en |
dc.description.provenance | Made available in DSpace on 2021-06-14T16:49:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ntu-97-R94629036-1.pdf: 1315776 bytes, checksum: 90cc3137a5de7d822f4c02fa5dd78139 (MD5) Previous issue date: 2008 | en |
dc.description.tableofcontents | 口試委員會審定書 i
誌謝 ii 中文摘要 iii 英文摘要 v 目錄 vii 圖次 xii 表次 xiii 縮寫表 xiv 第一章 緒言 1 第二章 文獻探討 3 第一節 鮑氏不動桿菌形態學及生化特性、培養基及致病性 3 第二節 鮑氏不動桿菌抗藥性之發展 5 第三節 鮑氏不動桿菌感染動物與環境抗藥性之探討 7 第四節 現今治療鮑氏不動桿菌有效之藥物 9 4.1 可利斯汀 9 4.2 sulbactam 9 4.3 carbapenems 10 4.4 四環素類抗生素 10 第五節 鮑氏不動桿菌之多重抗藥性 12 5.1 鮑氏不動桿菌對乙內醯胺類的抗藥性 12 5.2 鮑氏不動桿菌對胺基醣苷類的抗藥性機制 14 5.3 鮑氏不動桿菌對奎諾酮類藥物抗藥性機制 15 5.4 鮑氏不動桿菌對四環素類抗生素的抗藥性機制 15 第六節 抗藥性基因之傳遞位置 17 第七節 乙內醯胺酶 15 7.1 乙內醯胺酶結構 19 7.2 乙內醯胺酶之分類 19 7.2.1 布希分類法 19 7.2.2 安柏拉分類法 21 第八節 鮑氏不動桿菌目前全球常見超廣效性乙內醯胺酶 22 8.1 安柏拉分類A 22 8.1.1 TEM 22 8.1.2 SHV 22 8.1.3 PER-1 23 8.1.4 VEB-1 23 8.1.5 CTX-M 23 8.2 安柏拉分類B 24 8.2.1 IMP 24 8.2.2 VIM 24 8.3 安柏拉分類C 25 8.4 安柏拉分類D 25 8.4.1 OXA-23-like 25 8.4.2 OXA-58 26 8.4.3 OXA-51-like 26 8.4.4 OXA-24-like 27 第九節 台灣乙內醯胺酶與超廣效性乙內醯胺酶基因型 28 第十節 超廣效性乙內醯胺酶與公共衛生之觀點 29 第十一節 超廣效性乙內醯胺酶之檢測 30 11.1 表現型方式 30 11.2 分子診斷方法 31 第三章 材料與方法 33 第一節 實驗材料 33 1.1 培養基、試驗溶劑與配方 1.2 器具 35 1.3 儀器設備 36 第二節 實驗方法 37 2.1 實驗菌株之來源 37 2.1.1人類菌株 37 2.1.2雞隻檢體 38 2.2 細菌增殖與純化 38 2.3生化試驗 38 2.4 DNA的萃取 38 2.5 鑑定與菌種保存 39 2.5.1 API 20 NE鑑定 39 2.5.2 利用聚合酶鏈鎖反應鑑定不動桿菌 39 2.5.3 增幅核糖體DNA限制性分析 40 2.5.4 存菌 40 2.6 抗菌劑藥物敏感性試驗 41 2.7 聚合酶連鎖反應偵測乙內醯胺酶 42 2.7.1 blaTEM、blaSHV、ampC與ISAba1基因偵測 42 2.7.2 使用多重引子進行聚合酶鏈鎖反應偵測OXA基因 42 2.7.3 OXA-24-like基因定序 43 2.7.4 偵測OXA-51-like或OXA-58-like之啟動子ISAba1是否存在 43 2.8 洋菜膠體電泳分析、染色、照膠 43 2.9 聚合酶鏈鎖反應產物之純化 43 2.10 DNA序列定序 44 2.11 脈衝式電泳 44 2.11.1 染色體菌體包埋與清洗 44 2.11.2 鮑氏不動桿菌脈衝式電泳分析 45 第三節 統計分析 46 3.1 抗生素敏感性試驗統計分析 46 3.2 脈衝氏電泳圖譜分析 46 第四章 結果 47 第一節 鮑氏不動桿菌之培養分離結果 47 1.1 在人類菌株方面 47 1.2 養雞場 47 第二節 抗生素敏感性試驗結果 49 第三節 PCR偵測結果 51 3.1 利用聚合酶鏈鎖反應偵測blaTEM基因 51 3.2 利用聚合酶鏈鎖反應偵測blaSHV基因 51 3.3 偵測 AB ampC 基因 52 3.4 使用多引子聚合酶鏈鎖反應偵測OXA carbapenemases 52 第四節 人與雞分離株脈衝式電泳基因型別分析 55 第五章 討論 57 第一節 檢體採集與細菌分離、培養及鑑定之探討 57 1.1人類菌株來源 57 1.2 雞隻菌株來源 57 第二節 抗生素敏感性試驗之探討 59 第三節 鮑氏不動桿菌乙內醯胺酶分佈情形 66 3.1 鮑氏不動桿菌TEM乙內醯胺酶之分佈調查 66 3.2 鮑氏不動桿菌SHV乙內醯胺酶之分佈調查 67 3.3 鮑氏不動桿菌AmpC乙內醯胺酶之分佈調查 68 3.4 鮑氏不動桿菌OXA乙內醯胺酶之分布 68 第四節 鮑氏不動桿菌分子流行病學 70 第六章 結論 72 參考文獻 73 圖 次 圖一 人與雞隻鮑氏不動桿菌分離株對十六種抗微生物劑藥物敏感性試驗結果抗藥性百分比 88 圖二 各地區鮑氏不動桿菌分離株對十六種抗微生物劑藥物敏感性試驗結果抗藥性百分比 89 圖三 北部地區雞隻鮑氏不動桿菌脈衝氏電泳親源樹狀圖 90 圖四: 中部地區雞隻鮑氏不動桿菌脈衝氏電泳親源樹狀圖 91 圖五: 南部地區雞隻鮑氏不動桿菌脈衝氏電泳親源樹狀圖 92 圖六 台灣雞隻鮑氏不動桿菌脈衝氏電泳親源樹狀圖 93 圖七 人來源鮑氏不動桿菌脈衝氏電泳親源樹狀圖 94 圖八 人與雞來源鮑氏不動桿菌脈衝氏電泳親源樹狀圖 95 圖九 人與雞隻鮑氏不動桿菌抗藥性樹狀圖 96 圖十 人類鮑氏不動桿菌抗藥性樹狀圖 97 圖十一 雞隻鮑氏不動桿菌抗藥性樹狀圖 98 表 次 表一 北、中、南、東四地區採樣縣市、場數與雞隻數量統計表 99 表二 各地區雞隻鮑氏不動桿菌之分離率 100 表三 選用抗菌劑所使用之溶媒、稀釋液 101 表四 人與雞隻鮑氏不動桿菌分離株對16種抗菌劑之敏感性試驗的結果與抗藥性的判定濃度(μg/mL 102 表五 各地區雞隻鮑氏不動桿菌分離株對 16 種抗菌劑的MIC50 、MIC90與抗藥性之百分比 103 表六 聚合酶鏈鎖反應引子序列、黏合溫度、循環數與產物大小 104 表七 AMC表現型及blaTEM-1基因之數量及百分比 105 表八 比較SHV乙內醯胺酶胺基酸的位置 105 表九 偵測具有 ABampC Ceftazidime 最小抑制濃度分成三群 106 表十 ISAba1、OXA和meropenem MIC的關係 107 表十一 以75%相似值分成24群組,各群組人與雞隻鮑氏不動桿菌分離株所佔的數量及百分率 108 | |
dc.language.iso | zh-TW | |
dc.title | 雞隻與人類鮑氏不動桿菌分離株藥物敏感性之差異 | zh_TW |
dc.title | Antimicrobial susceptibility differences of Acinetobacter baumannii between chicken and human isolates | en |
dc.type | Thesis | |
dc.date.schoolyear | 96-2 | |
dc.description.degree | 碩士 | |
dc.contributor.oralexamcommittee | 蔡向榮(Hsiang-Jung Tsai),周崇熙(Chung-Hsi Chou),賴信志(Hsin-Chih Lai) | |
dc.subject.keyword | 鮑氏不動桿菌,改良LAM 培養基,藥物敏感性,乙內醯胺酶,超廣效性乙內醯胺酶,脈衝式電泳, | zh_TW |
dc.subject.keyword | Acinetobacter baumannii,Modified Leeds Acinetobacter Medium,Antimicrobial susceptibility,Beta-lactamase,Extended spectrum β-lactamases,Pulsed-field gel electrophoresis, | en |
dc.relation.page | 108 | |
dc.rights.note | 有償授權 | |
dc.date.accepted | 2008-07-31 | |
dc.contributor.author-college | 生物資源暨農學院 | zh_TW |
dc.contributor.author-dept | 獸醫學研究所 | zh_TW |
顯示於系所單位: | 獸醫學系 |
文件中的檔案:
檔案 | 大小 | 格式 | |
---|---|---|---|
ntu-97-1.pdf 目前未授權公開取用 | 1.28 MB | Adobe PDF |
系統中的文件,除了特別指名其著作權條款之外,均受到著作權保護,並且保留所有的權利。