表沒食子兒茶酚沒食子酸對大鼠視神經軸突截斷後 神經節細胞的保護作用

Abstract

表沒食子兒茶酚沒食子酸 (Epigallocatechin-3-gallate, EGCG)，屬於綠茶中兒茶素的主要成份之一，具有非常強大之抗氧化能力。 本實驗的目的為觀察EGCG在視神經軸突截斷之動物，是否可保護視網膜神經節細胞，並且更進一步探討其保護效應的機制。 我們使用雌性之Wistar大鼠，先由上丘(superior colliculus)注射5% Fluorogold來標示視網膜神經節細胞。並在眼球後方1 mm處將視神經軸突截斷。在手術進行前30分鐘，先以腹腔注射EGCG (50 mg/kg)，在手術後2天及4天時各增一劑，第7天時計數神經節細胞之存活率。結果發現，神經節細胞之存活率由對照組的45.9%顯著提升至EGCG組的58.1% (p=0.017)。 利用西方墨點法偵測蛋白含量得知：GFAP的表現量在手術後第3天即顯著增加，可持續至第7天，但給EGCG後發現在第5天時GFAP之表現量有顯著被抑制之情形。而p-ERK之表現量在手術後第5天即有顯著增加之情況，給予EGCG更增加其表現量。此外，利用眼內注射給予U0126 (200 pmol)抑制MAPK/ERK路徑，發現抑制p-ERK可將EGCG促進細胞存活能力阻斷。顯示MAPK/ERK路徑可能參與EGCG之神經保護作用。同時我們也觀察到促進細胞凋亡分子Bax之表現在在手術後第5天有顯著增加，給予EGCG後表現量則被抑制。而抗細胞凋亡之蛋白Bcl-2則無顯著差異。nNOS在手術後第3天表現量即顯著上升，同樣可持續至第7天。給予EGCG後第5天能使其表現量下降，顯示EGCG之保護性可能和調控NO有關。最後我們也探討另一條與促進細胞存活有關之PI3-K/Akt路徑，發現在手術後第1天p-Akt表現量即顯著增加，可持續至第5天。而給予EGCG發現於第3天時可使其表現量更增加。利用眼內注射給予LY294002 (200 pmol)抑制PI-3K/Akt路徑，發現抑制p-Akt可將EGCG促進細胞存活能力阻斷。顯示PI3-K/Akt路徑亦可能參與EGCG之神經保護作用。 綜合以上，我們認為在此視神經軸突截斷模式中，EGCG之保護效應於第五天可能為關鍵之時間點。而EGCG可能透過活化MAPK/ERK與PI3-K/Akt之訊息傳遞路徑對視網膜神經節細胞展現其神經保護效應。