請用此 Handle URI 來引用此文件：
http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/23454完整後設資料紀錄
| DC 欄位 | 值 | 語言 |
|---|---|---|
| dc.contributor.advisor | 許 輔 | |
| dc.contributor.author | Tsai-Jen Wu | en |
| dc.contributor.author | 吳綵籈 | zh_TW |
| dc.date.accessioned | 2021-06-08T05:01:51Z | - |
| dc.date.copyright | 2010-10-05 | |
| dc.date.issued | 2010 | |
| dc.date.submitted | 2010-09-17 | |
| dc.identifier.citation | 王淑君。1999。台灣金線連抗氧化酵素之研究。國立台灣大學藥學研究所碩士論文。
江芙美。2003。臺灣金線連成分－天麻素、天麻苷元及尿嘧啶之藥物動力學研究。中國醫學大學藥學研究所碩士論文。 林宗輝。2000。臺灣蘭科植物－石斛、連珠石斛與臺灣金線連之化學成分及藥理活性研究。中國醫學大學藥學研究所碩士論文。 吳怡箴。2004。金線連多醣對小鼠免疫反應調節之研究。台北醫學大學醫學研究所碩士論文。 陳慧如。1993。中藥金線連對兔子血小板花生四烯酸新陳代謝的影響及其有效成分之研究。國立成功大學碩士論文。 邢桂春、張成崗、魏漢東、賀福初。2001。採用RACE 獲得全長人新基因 MAGE-D1。中國生物化學與分子學報。 17(2): 203-208。 施純青。2001。台灣金線連對小鼠之藥理活性研究。中國醫學大學藥學所博士論文。 柯俊良。1985。由金針菇分離免疫調節功能蛋白質及分析其胺基酸序列與進行基因選殖和表現。國立台灣大學醫學院生化學研究所博士論文。 郭哲佑。2007。研究金線連免疫調節蛋白 IPAF 活化小鼠 B 淋巴細胞之機制及建立其免疫分析平台。國立臺灣大學園藝學研究所碩士論文。 許如君。2005。台灣金線連免疫調節蛋白IPAF活化免疫細胞之機制。國立臺灣大學園藝學研究所碩士論文。 許靜宜。2003。金線連與黃豆皮萃取物對抗氧化力與骨質疏鬆的影響。國立嘉義大學食品科學系碩士論文 張文瀠。2004。台灣金線連免疫調節蛋白之純化與活性分析。國立臺灣大學園藝學研究所碩士論文。 徐致芬。2003。台灣金線連有效分劃對小鼠非特異性免疫的調節。中國醫藥大學醫學研究所碩士論文。 曹巧吟。2003。樟芝中免疫調節蛋白的純化與其生理活性之探討。國立台灣大學園藝學研究所碩士論文。 黃大峰。1999。金線連及苧麻屬植物之保肝活性機轉研究。高雄醫學大學天然藥物研究所碩士論文。 黃美枝。2005。不同前處理及乾燥方法對台灣金線連水粗萃物和酒精萃取物抗氧化性的影響。國立中興大學食品暨應用生物科技學系碩士論文。 劉新裕、張同吳、王昭月、張愛華、王順成。1998。金線連之品種特性與毒性研究。中華農業研究。 47(3): 242-258。 劉武哲、詹前朕、侯嘉隆。1993。金線連抽取物抑制A型流行性感冒病毒之試管內研究。中醫藥年報。 12(3): 171-190。 蕭翌柱、廖俊旺、吳明哲。2008。台灣金線連生技產品之毒理安全性評估 Ⅰ. 台灣金圓酒對大鼠之口服急毒性試驗。台灣農業研究。 57(3): 183-192。 蔡佳慈。2007。金線連糖苷對四氯化碳誘導之小鼠肝損傷的保護作用：經由抑制庫氏細胞的活化。中國醫學大學醫學研究所碩士論文。 蔣健興。2002。金線連水溶性多醣區分之組成與免疫活性分析。國立臺灣大學食品科技研究所。 鄭佳如。2002。臺灣金線連對前列腺素F2α所誘導老鼠心臟肌原細胞肥大影響之研究。國立成功大學生物科技研究所碩士論文。 蕭宏柏。2004。台灣金線連有效萃取物對卵蛋白誘發小鼠呼吸道過度反應之免疫調節作用。中國醫藥大學醫學研究所碩士論文。 蕭翌柱、高瑞隆、賴瑞聲、胡敏夫。2007。台灣金線連之產品開發及利用。林業研究專訊。 14(4)。 蕭翌柱、蔡新聲。2003。臺灣金線連風華再現。科學發展 (364) 16-21。行政院國家科學委員會。 蕭翌柱、陳威臣、呂佳宜、蔡新聲。1995。台灣金線連之組織培養 Ⅰ. 改進種子萌芽之研究。中華農業研究。 44: 279-286。 謝俊生。2001。台灣金線連抑制肝癌細胞生長抗氧化機制的探討。中國醫藥學院醫學研究所碩士論文。 錢家樂。2004。樟芝免疫調節蛋白基因選殖及表現之研究。國立台灣大學園藝學研究所碩士論文。 Arnheim, N.; Erlich, H., Polymerase chain reaction strategy. Annu. Rev. Biochem. 1992, 61, 131-56. Benjamin, C. F.; Figueiredo, R. C.; Henriques, M. G. M. O.; Barjafidalgo, C., Inflammatory and anti-inflammatory effects of soybean agglutinin. Braz. J. Med. Bio. Res. 1991, 30,873-881. Carney, J. P.; McKnight, C.; Vanepps, S.; Kelley, M. R., Random rapid amplification of cDNA ends (RRACE) allows for cloning of multiple novel human cDNA fragments containing (CAG)n repeats. Gene 1995, 155 (2), 289-292. Du, X. M.; Irino, N.; Furusho, N.; Hayashi, J.; Shoyama, Y., Pharmacologically active compounds in the Anoectochilus and Goodyera species. Nat. Med. (Tokyo) 2008, 62 (2), 132-48. Du, X. M.; Sun, N. Y.; Hayashi, J.; Chen, Y.; Sugiura, M.; Shoyama, Y., Hepatoprotective and antihyperliposis activities of in vitro cultured Anoectochilus formosanus. Phytother. Res. 2003, 17 (1), 30-3. Du, X. M.; Sun, N. Y.; Irino, N.; Shoyama, Y., Glycosidic constituents from in vitro Anoectochilus formosanus. Chem. Pharm. Bull. (Tokyo) 2000, 48 (11), 1803-4. Fang, H. L.; Wu, J. B.; Lin, W. L.; Ho, H. Y.; Lin, W. C., Further studies on the hepatoprotective effects of Anoectochilus formosanus. Phytother. Res. 2008, 22 (3), 291-6. Frohman, M. A., Rapid amplification of complementary DNA ends for generation of full-length complementary DNAs: Thermal race. In Methods in Enzymology, Ray, W., Ed. Academic Press: 1993; Vol. Volume 218, pp 340-356. Garnier, J.; Osguthorpe, D. J.; Robson, B., Analysis of the accuracy and implications of simple methods for predicting the secondary structure of globular proteins. J. Mol. Bio. 1978, 120 (1), 97-120. Gray, W., Protein: Biochemistry and Biotechnology. Wiley. 2002. Huang, D. D.; Law, C. S.; Mark, O. T., Effects of tissue-cultured Anoectochilus formosanus Hay. Extracts the arachidonate metabolism. Bot. Bull. Academia Sinica. 1991,32, 113-119. Hsieh, M. T.; Wu, C. R.; Chen, C. F., Gastrodin and p-hydroxybenzyl alcohol facilitate memory consolidation and retrieval, but not acquisition, on the passive avoidance task in rats. J. Ethnopharmacol. 1997, 56 (1), 45-54. Hsieh, C. C.; Hsiao, H. B.; Lin, W. C., A standardized aqueous extract of Anoectochilus formosanus modulated airway hyperresponsiveness in an OVA-inhaled murine model. Phytomedicine 2010, 17 (8-9), 557-62. Jordinson, M.; Deprez, P. H.; Playford, R. J.; Heal, S.; Freeman, T. C.; Alison, M.; Calam, J., Soybean lectin stimulates pancreatic exocrine secretion via CCK-A receptors in rats. Am. J. Phy. 1996, 270, G653-659. Jordinson, M.; Playford, R. J.; Calam, J., Effects of a panel of dietary lectins on cholecystokunun release in rats. Am. J. Phy. 1997, 273, G646-650. Karasaki, Y.; Tsukamoto, S.; Mizusaki, K., A garlic lectin exerted an antitumor activity and induced apoptosis in human tumor cells. Food Res. Int. 2001, 34, 7-13. Kino, K.; Yamashita, A.; Yamaoka, K.; Watanabe, J.; Tanaka, S.; Ko, K.; Shimizu, K.; Tsunoo, H., Isolation and characterization of a new immunomodulatory protein, ling zhi-8 (LZ-8), from Ganoderma lucidium. J. Biol. Chem. 1989, 264 (1), 472-8. Lei, H. Y.; Chang, C. P., Lectin of Concanavalin A as an anti-hepatoma therapeutic agent. J. Bio. Sci. 2009, 16 (10). Lin, C. C.; Huang, P. C.; Lin, J. M., Antioxidant and hepatoprotective effects of Anoectochilus formosanus and Gynostemma pentaphyllum. Am. J. Chin. Med. 2000, 28 (1), 87-96. Lin, J. M.; Lin, C. C.; Chiu, H. F.; Yang, J. J.; Lee, S. G., Evaluation of the anti-inflammatory and liver-protective effects of anoectochilus formosanus, ganoderma lucidum and gynostemma pentaphyllum in rats. Am. J. Chin. Med. 1993, 21 (1), 59-69. Lis, H.; Sharon, N., Lectins as molecules and as tools. Annu. Rev. Biochem. 1986, 55, 35-67. Liu, W.; Yang, N.; Ding, J.; Huang, R. H.; Hu, Z.; Wang, D. C., Structural mechanism governing the quaternary organization of monocot mannose-binding lectin revealed by the novel monomeric structure of an orchid lectin. J. Biol. Chem. 2005, 280 (15), 14865-76. Masuda, K.; Ikeuchi, M.; Koyama, T.; Yamaguchi, K.; Woo, J. T.; Nishimura, T.; Yazawa, K., Suppressive effects of Anoectochilus formosanus extract on osteoclast formation in vitro and bone resorption in vivo. J. Bone. Miner. Metab. 2008, 26 (2), 123-9. Murasugi, A.; Tanaka, S.; Komiyama, N.; Iwata, N.; Kino, K.; Tsunoo, H.; Sakuma, S., Molecular cloning of a cDNA and a gene encoding an immunomodulatory protein, Ling Zhi-8, from a fungus, Ganoderma lucidum. J. Biol. Chem. 1991, 266 (4), 2486-93. Sa, Q.; Wang, Y.; Li, W.; Zhang, L.; Sun, Y., The promoter of an antifungal protein gene from Gastrodia elata confers tissue -specific and fungus-inducible expression patterns and responds to both salicylic acid and jasmonic acid. Plant Cell Rep. 2003, 22 (1), 79-84. Schaefer, B. C., Revolutions in rapid amplification of cDNA ends: new strategies for polymerase chain reaction cloning of full-length cDNA ends. Anal. Biochem. 1995, 227 (2), 255-73. Shih, C. C.; Wu, Y. W.; Lin, W. C., Scavenging of reactive oxygen species and inhibition of the oxidation of low density lipoprotein by the aqueous extraction of Anoectochilus formosanus. Am. J. Chin. Med. 2003, 31 (1), 25-36. Shyur, L. F.; Chen, C. H.; Lo, C. P.; Wang, S. Y.; Kang, P. L.; Sun, S. J.; Chang, C. A.; Tzeng, C. M.; Yang, N. S., Induction of apoptosis in MCF-7 human breast cancer cells by phytochemicals from Anoectochilus formosanus. J. Biomed. Sci. 2004, 11 (6), 928-39. Stein, G. M.; Schietzel, M.; Bussing, A., Mistletoe in immunology and the clinic (short review). Anticancer Res. 1998, 18, 3247-3250. Van Damme, J. M.; Smeets, K.; Torrekens, S.; Van Leuven, F.; Peumans, W. J., Characterization and molecular cloning of mannose-binding lectins from the Orchidaceae species Listera ovata, Epipactis helleborine and Cymbidium hybrid. Eur. J. Biochem. 1994, 221 (2), 769-77. Wang, H. X.; Yang, T.; Zeng, Y.; Hu, Z., Expression analysis of the gastrodianin gene ga4B in an achlorophyllous plant Gastrodia elata Bl. Plant Cell Rep. 2007, 26 (3), 253-9. Wang, S. Y.; Kuo, Y. H.; Chang, H. N.; Kang, P. L.; Tsay, H. S.; Lin, K. F.; Yang, N. S.; Shyur, L. F., Profiling and characterization antioxidant activities in Anoectochilus formosanus hayata. J. Agric. Food Chem. 2002, 50 (7), 1859-65. Wang, X.; Bauw, G.; Van Damme, E. J.; Peumans, W. J.; Chen, Z. L.; Van Montagu, M.; Angenon, G.; Dillen, W., Gastrodianin-like mannose-binding proteins: a novel class of plant proteins with antifungal properties. Plant J. 2001, 25 (6), 651-61. Wu, J. B.; Chuang, H. R.; Yang, L. C.; Lin, W. C., A standardized aqueous extract of Anoectochilus formosanus ameliorated thioacetamide-induced liver fibrosis in mice: the role of Kupffer cells. Biosci. Biotechnol. Biochem. 2010, 74 (4), 781-7. Wu, J. B.; Lin, W. L.; Hsieh, C. C.; Ho, H. Y.; Tsay, H. S.; Lin, W. C., The hepatoprotective activity of kinsenoside from Anoectochilus formosanus. Phytother. Res. 2007, 21 (1), 58-61. | |
| dc.identifier.uri | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/23454 | - |
| dc.description.abstract | 台灣金線連 (Anoectochilus formosanus Hayata) 是具有台灣地域意義的保健植物，本研究室先前已純化發現金線連免疫調節蛋白 IPAF，分子量為 14 kDa，等電點為 5.4。IPAF 可透過細胞表面受器 TLR4 活化小鼠巨噬細胞，不需要 T 淋巴細胞即可直接活化 B 淋巴細胞，也推測 IPAF 屬胸線非依賴性第一型抗原 (type 1 thymus-independent antigen)，本研究的目的為選殖 IPAF 的基因。首先利用 N 端胺基酸定序分析取得 IPAF 部分胺基酸序列 ASSLGTGGTLRNN，並依結果設計專一性 degenerate 引子，及依序利用 3’-RACE 及 5’-RACE 技術進一步選殖取得 IPAF cDNA，分析IPAF 之核甘酸與胺基酸序列，並與 NCBI 資料庫比對是否有相似序列。結果顯示IPAF cDNA全長為654-bp，其 ORF 為 474-bp，ORF 可轉譯 158個胺基酸，經SignalP prediction 程式分析得到前面的第 1~25 個胺基酸為 signal peptide，經 compute pI/Mw tool 程式計算第 26~158個胺基酸序列，推測其分子量為 14312.02 Da，pI 值為 9.62，且其分子量與天然純化之 IPAF 分子量相近。至NCBI 資料庫比對 IPAF 胺基酸序列結果顯示，IPAF 與蘭科植物 Epipactis helleborine lectin 具有高度相似。進一步將 IPAF 的 cDNA 構築於 pET30-IPAF 表現載體，以大腸桿菌為宿主進行融合蛋白，經 1 mM IPTG 誘導 6 個小時可以大量得到重組 IPAF。本研究選殖出的 IPAF 胺基酸序列，未來可更進一步探討 IPAF 之蛋白質結構、活性部位及保健功效。 | zh_TW |
| dc.description.abstract | Some previous studies have showed that IPAF (immunodulatory protein of Anoectochilus formosamus) could activate mouse macrophages through TLR4 pathway and directly stimulated the proliferation of B lymphocytes without the help from T lymphocytes. These results suggested that IPAF might be a type 1 thymus-independent antigen. The objective of this study was to clone the cDNA encoding IPAF. First, we used the N-terminal amino acid sequence assay to acquire the N-terminal amino acid sequence of IPAF, ASSLGTGGTLRNN, and designed the IPAF degenerated specificity primers based on the N-terminal amino acid sequence. We then used 3’-rapid amplification of cDNA ends (RACE) and 5’ RACE PCR to generate the full-length IPAF cDNA. We then searched in NCBI database for similar nucleotide and amino acid sequences. The result showed that the full-length IPAF cDNA was 654-bp, and ORF was 474-bp, respectively. The protein encoded consisted of 158 amino acid residues. It was predicted that IPAF contained a putative residual signal peptide of 25 residues by the SignalP prediction assay. The molecular weight and pI value of amino acid sequence from residue 26 to 158 as predicted by the compute pI/Mw tool assay were 14312.02 Da and 9.62 respectively, which were similar to the native IPAF. The result of cross searching in NCBI database showed that the amino acid sequence of IPAF was highly similar to that of Epipactis helleborine lectin. A cDNA encoding mature IPAF was cloned into pET30 plasmid vector and expressed in Escherichia coli.. A fusion protein could then be induced by 1mM IPTG for six hours. This study suggested that the amino acid sequence of IPAF provided supportive information for future investigation regarding the structure, active domain and functional analysis of IPAF. | en |
| dc.description.provenance | Made available in DSpace on 2021-06-08T05:01:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ntu-99-R97628201-1.pdf: 3607311 bytes, checksum: b3f9570788f4a4be981703c5b888cef4 (MD5) Previous issue date: 2010 | en |
| dc.description.tableofcontents | 中文摘要………………………………………………………………….8
英文摘要…………………………………………………………………..9 第一章 研究背景…………………………………………………….…10 壹、前言………………………………………………………………….10 貳、金線連的種類與生長性…………………………………………….10 叁、台灣金線連之成分………………………………………………….12 肆、台灣金線連的藥理作用與生理活性之研究……………………….13 (1) 民俗用法……………………………………………………..…14 (2) 抗氧化作用……………………………………………………..14 (3) 毒性與安全性…………………………………………………..15 (4) 保肝作用………………………………………………………..15 (5) 抗癌效果………………………………………………………..16 (6) 抗發炎及抗過敏能力…………………………………………..17 (7) 免疫調節反應…………………………………………………..18 (8) 其它……………………………………………………………..18 伍、台灣金線連免疫調節蛋白相關之研究…………………………….19 陸、利用 RACE 選殖基因之策略……………………………………....21 (1) 利用 N 端胺基酸序列設計 degenerated primer 選殖……….21 (2) Rapid Amplification of cDNA ends (RACE) 技術於基因選殖之 利用………………………………………………………………23 柒、 研究動機與目的…………………………………………………....25 第二章 材料與方法………………………………………………….…26 壹、台灣金線連免疫調節蛋白之純化及生化特性分析…………….…..26 (1) 蛋白萃取………………………………………………………...27 (2) 蛋白質硫酸銨沉澱與透析……………………………………...28 (3) Bicinchoninic acid (BCA) 蛋白質濃度之測定………………...28 (4) SDS-膠體電泳分析 (sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis) ………………………………………………….28 (5) 西方轉漬分析 (Western blot) ………………………………….29 貳、台灣金線連免疫調節蛋白基因之選殖…………………………….30 (1) N 端胺基酸定序分析…………………………………………..32 (2) 台灣金線連total RNA 之抽取………………………………....33 (3) 3’rapid amplification of cDNA ends (3’RACE).………………..33 (4) 5’rapid amplification of cDNA ends (5’RACE)………………...35 (5) 依 a36-700 基因片段設計 IPAF 專一性子………………….36 (6) DNA電泳分析與切膠純化…………………………………….36 (7) T-A coloning……………………………………………………..37 (8) 大腸桿菌之轉形 (Escherichia coli transformation) 及藍白篩選 ………………………………………………………………...…37 参、重組蛋白質基因之構築與表現…………………………………...…38 (1) pET30IPAF表現載體之構築……………………………….…39 (2) 重組台灣金線連免疫調節蛋白質 (rIPAF) 之誘導表現……...42 (3) 重組台灣金線連免疫調節蛋白 (rIPAF) 之純化……………...42 第三章 結果……………………………………………………………..44 壹、台灣金線連免疫調節蛋白之純化與生化特性分析………………...44 (1) IPAF 之純化………………………………………….................44 (2) SDS-膠體電泳分析……………………………………………..44 (3) 西方轉漬分析 (Western blot) …………………………………44 貳、台灣金線連免疫調節蛋白基因之選殖…………………………...…44 (1) N端胺基酸定序分析……………………………………………45 (2) 台灣金線連 total RNA 之抽取…………………………...……45 (3) 3’rapid amplification of cDNA ends (3’RACE) ……………..…45 (4) 5’rapid amplification of cDNA ends (5’RACE) ………………..47 (5) 依 a36-700 基因片段設計 IPAF 專一性引子……………….49 (6) 以 RT-PCR 確認 IPAF cDNA 序列…………………………..49 叁、IPAF 序列分析………………………………………………………50 (1) IPAF 胺基酸序列 signal peptide 之預測……………………..50 (2) 確認 IPAF cDNA 之轉譯終止碼……………………………...50 (3) IPAF 二級結構之預測………………………………………….51 (4) GenBank submission………………………………………….... 51 (5) IPAF 一級結構的同源性比對……………………………….…51 肆、重組蛋白質基因之構築與表現……………………………………...52 (1) pET30-IPAF 表現載體之構築………………………………....52 (2) 重組台灣金線連免疫調節蛋白 (rIPAF) 之誘導表現與純化...52 第四章 討論…………………………………………………………..…54 參考文獻………………………………………………………..…………59 表…………………………………………………………………………..66 圖………………………………………………………………………..…72 附錄……………………………………………………………………..…95 | |
| dc.language.iso | zh-TW | |
| dc.title | 台灣金線連免疫調節蛋白基因選殖及表現之研究 | zh_TW |
| dc.title | Molecular Cloning and Gene Expression of the Immunomodulatory Protein IPAF from Anoectochilus formosanus | en |
| dc.type | Thesis | |
| dc.date.schoolyear | 99-1 | |
| dc.description.degree | 碩士 | |
| dc.contributor.oralexamcommittee | 許先業,周志輝,劉?睿,繆希椿 | |
| dc.subject.keyword | 台灣金線連,免疫調節蛋白,大腸桿菌,融合蛋白,RACE PCR, | zh_TW |
| dc.subject.keyword | Anoectochilus formosamus Hayata,immunodulatory protein,Escherichia coli.,fusion protein,RACE PCR, | en |
| dc.relation.page | 96 | |
| dc.rights.note | 未授權 | |
| dc.date.accepted | 2010-09-21 | |
| dc.contributor.author-college | 生物資源暨農學院 | zh_TW |
| dc.contributor.author-dept | 園藝學研究所 | zh_TW |
| 顯示於系所單位： | 園藝暨景觀學系 | |
文件中的檔案：
| 檔案 | 大小 | 格式 | |
|---|---|---|---|
| ntu-99-1.pdf 目前未授權公開取用 | 3.52 MB | Adobe PDF |
系統中的文件，除了特別指名其著作權條款之外，均受到著作權保護，並且保留所有的權利。