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http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/15805
標題: | EKLF在紅血球分化過程中對Tal1/SCL的調控 EKLF-Mediated Gene Expression of Tal1/SCL During Differentiation of Erythroid Cells |
作者: | Yu-Szu Huang 黃友思 |
指導教授: | 沈哲鯤(Che-Kun James Shen) |
關鍵字: | 紅血球,基因交互作用,小鼠胚胎發育,細胞分化,功能獲得性實驗,功能缺失性實驗, EKLF,Tal1,erythroid differentiation,gene interaction,ChIP-chip,microarray,reporter assay, |
出版年 : | 2012 |
學位: | 碩士 |
摘要: | 紅血球是哺乳類動物胚胎發育時期首先形成的細胞,在胚胎時期供給個體所需的氧氣,其分化與成熟對個體的生存是必需的。Erythroid Kruppel-like Factor ( EKLF )是一個表現在紅血球細胞中的轉錄因子,目前已知會在小鼠胚胎發育後期啟動成人時期β-globin (βmaj及βmin)的表現, 並且抑制胎兒時期β-like globin的表現(βh1及εy), 藉此機制達成成人與胎兒時期β-like globin的轉換。以蛋白質結構而言,EKLF會藉由它在C端的三個鋅手指辨認並且結合到它的保守性DNA序列CACCC,藉此調控下游基因的表現。而除了調控β-like globin的表現以外,近幾年的研究更發現EKLF在紅血球分化與成熟的過程中扮演重要的角色,但詳細的分子機制目前還未明瞭。Tal1 ( SCL ) 是另一個與造血功能相關的轉錄因子,目前研究指出它對紅血球的分化與成熟是亦是必需的。以蛋白質結構而言,它是藉由它的bHLH domain與下游基因的啟動子結合並進一步啟動下游基因的表現。為了探討EKLF是藉由何種機制促進紅血球的分化與成熟,我們利用microarray的技術分析Eklf基因剔除小鼠的胚胎在受精後第14.5天的肝臟細胞中,基因表現的情形;結果發現在基因剔除小鼠中,Tal1 mRNA的表現量相較於wild-type小鼠而言有明顯的下降。此外,我們也利用ChIP-chip的技術去找尋Wild-type小鼠中EKLF結合到哪些下游基因的啟動子,結果發現EKLF會結合到Tal1基因的啟動子區域。這些結果暗示著EKLF可能會直接調控Tal1基因並且促進其表現。而利用Real-time PCR及ChIP-PCR的實驗再次確認上述結果,也得到同樣的結論。在得到這些初步結果之後,我們進一步在老鼠紅血球細胞株 (murine erythroleukemia cell, MEL)中進行功能獲得性實驗(gain-of-function study), 由此實驗中我們進一步發現,外加EKLF會造成Tal1 mRNA的表現量上升。此外,在功能缺失性實驗(loss-of-function study)中,我們發現EKLF表現量下降後,Tal1基因的表現也有顯著下降。總結而言,目前的實驗結果暗示著EKLF位於Tal1的上游促進其表現,並且藉由這個調控方式促進紅血球的分化與成熟。 Erythropoiesis is a complex multi-step process that begins with megakaryocytic/erythroid (MEP) progenitors derived from the pluripotent hematopoietic stem cells (HSCs) then terminates with the production of erythrocytes (RBCs). Erythroid Kruppel-like factor, EKLF is essential for the activation of the adult |
URI: | http://tdr.lib.ntu.edu.tw/jspui/handle/123456789/15805 |
全文授權: | 未授權 |
顯示於系所單位: | 分子醫學研究所 |
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